犬瘟热病毒TJ株N基因的克隆及序列分析.pdfVIP

Heilon~iangAnimalScience 88 andVeterinaryMedicine No12 2009 犬瘟热病毒 TJ椿 N基因的壳灌序列分折 艾 霞 ，艾丽萍 ，杨百亮 (1．天津农学院 动物科学系，天津 300384；2．天津商业大学 生物技术与食品科学学院，天津 300134) 中图分类号：$852．655 文献标识码 ：B 文章编号：1004—7034(2009)12—0088—03 犬瘟热病毒属副黏病毒科麻疹病毒属，主要编码 应用DNASTAR软件包 MegAlign软件 的Clustal 核蛋白、磷蛋白、基质膜蛋 白、融合蛋 白、附着或血凝 V方法，对犬瘟热病毒TJ株N基因序列结果及其推 蛋白和大蛋 白等6种蛋 白。研究针对从临床分离得 导出的氨基酸序列与GenBank中收录的犬瘟热病毒 到的1株犬瘟热病毒 rrJ株进行了N蛋 白基因的克 疫苗株及地方毒株 N基因核苷酸、氨基酸序列进行 隆和序列分子比对，为广泛探讨犬瘟热病毒的分子流 比较分析，并绘制进化树。 行病学提供了较好的基础和素材。 2 结果与分析 1 材料与方法 2．1 犬瘟热病毒 TJ株N基因RT—PCR扩增结果 1．1 犬瘟热病毒 rrJ株 犬瘟热病毒 TJ株N基因的扩增产物经 1％琼脂 犬瘟热病毒 耵 株，笔者从临床疑似犬瘟热的病 糖凝胶电泳检测，结果可见单一、明亮的条带，基因片 死犬脏器中分离并经 SPF鸡胚传代获得，鉴定后由 段长约 1700bp，与预期结果相符(见图1)。 天津农学院动物科学系药理教研室保存。 1．2 质粒、菌株及主要试剂 大肠埃希菌DH5e，由天津农学院动物科学系药 2000bp 理教研室保存；限制性内切酶、pMD18一T载体、一步 法 RT—PCR试剂盒，购 自宝生物工程 (大连)有限公 司；TrizolRNA提取试剂 、质粒小量提取试剂盒 、DNA I 片段回收纯化试剂盒、DNA凝胶 回收试剂盒，均由北 京天佑达生物工程科技有限公司提供。 M．DL一2000Marker；1，2．犬瘟热病毒 耵株。 图 1 犬瘟热病毒 ¨株 N基因RT—PCR扩增结果 1．3 病毒RNA的抽提及RT—PCR反应 RNA的抽提参照试剂盒说明进行。根据 Gen— 2．2 犬瘟热病毒 T．I株N基因克隆及测序 Bank中犬瘟热全基因组 (AF014953)N基因编码区 PCR产物经纯化、回收后克隆到pMD18一T载体 序列，利用DNASIS软件设计了1对扩增N基因完整 中，重组质粒经PCR鉴定扩增出目的条带，表明N基 编码 框 特异 性 引物，预 期 扩 增 的片段 长 度 为 因片段已成功插入到pMD18一T载体中。取阳性重 1727bp，其中N基因完整序列为 1572bp。引物序 歹Ⅱ：Nf5 一ACAAGGCTAGGGTICAGA～ 3．Nr5 一 组质粒进行测序，结果表明犬瘟热病毒 TJ株N基因 完整阅读框架全长均为 1572bp，共编码 523个氨基 CTGCCA哪 AGGGATAGAACG 一3。引物 由北