化妆品中米诺地尔检测方法（暂行）.docVIP

化妆品中米诺地尔检测方法（暂行） 1 范围 本方法规定了测定化妆品中米诺地尔的高效液相色谱法。 本方法适用于醇-水、水溶液型发用化妆品中米诺地尔含量的测定。 当样品取样量为1g时，本方法米诺地尔的最低检出限为10μg/g。 2 原理 米诺地尔在280nm处有紫外吸收，可用反相高效液相色谱（HPLC）分离，并根据保留时间定性，峰面积定量。 3 试剂与材料 3.1 甲醇，色谱纯。 3.2 冰醋酸，分析纯。 3.3 磺基丁二酸钠二辛酯，分析纯。 3.4 高氯酸，分析纯。 3.5 磺基丁二酸钠二辛酯溶液[ρ=3.0g/L]：称取磺基丁二酸钠二辛酯3.0g，加甲醇-水-冰醋酸（730∶270∶10）混合溶液约950mL溶解，用高氯酸调节至pH3.0，用甲醇-水-冰醋酸（730∶270∶10）混合溶液稀释至1L，摇匀。 3.6 米诺地尔标准储备溶液[ρ=0.25g/L]：准确称取米诺地尔对照品0.025g（精确至0.0001g），置于100mL量瓶中，加磺基丁二酸钠二辛酯溶液（3.5）适量溶解并定容，摇匀。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪，紫外检测器，配色谱工作站。 4.2 超声波清洗器。 4.3 高速离心机。 5 分析步骤 5.1 样品预处理 准确称取样品约1.0g（精确至0.001g），置于50mL量瓶中，加磺基丁二酸钠二辛酯溶液（3.5）约40mL，常温超声提取15min，用磺基丁二酸钠二辛酯溶液（3.5）定容，摇匀。必要时可离心，取上清液经0.45μm 滤膜过滤，续滤液作为待测溶液备用。 5.2 测定 5.2.1 色谱参考条件 5.2.1.1 色谱柱：C18 柱，250mm×4.6mm，5μm； 5.2.1.2 流动相：磺基丁二酸钠二辛酯溶液（3.5）； 5.2.1.3 流速：1.0mL/min； 5.2.1.4 检测波长：280nm； 5.2.1.5 柱温：室温。 5.2.2 校准曲线的制备 分别移取米诺地尔标准储备溶液（3.6）0.20mL、1.00mL、5.00 mL、10.00 mL、20.00mL置于50mL量瓶中，用磺基丁二酸钠二辛酯溶液（3.5）定容，摇匀。配成含米诺地尔分别为1、5、25、50、100μg/mL 的标准溶液。在设定的色谱条件下，分别精密量取10μL 注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并绘制峰面积—米诺地尔浓度（μg/mL）校准曲线，线性相关系数不小于0.999。 5.2.3 样品测定 在设定的色谱条件下，精密量取10μL 待测溶液注入高效液相色谱仪分析。若样品中米诺地尔含量超过100μg/mL，应用磺基丁二酸钠二辛酯溶液（3.5）适当稀释后测定，记录色谱图，根据峰面积，以校准曲线计算待测溶液中米诺地尔的质量浓度。按以上步骤取两份样品进行平行试验，并计算相对平均偏差（≤10%）。 6 计算 ω（米诺地尔）= 式中：ω（米诺地尔）—样品中米诺地尔的质量分数，μg/g； ρ—从校准曲线上查得的待测溶液中米诺地尔的质量浓度，μg/mL； V—样品定容体积，mL； m—样品取样量，g。 7 色谱图 图1 米诺地尔标准溶液（25μg/mL）色谱图 8 阳性结果的确认 测定过程中，如果有阳性结果，应采用液相色谱-质谱法进一步确证（参见附录）。 附录： 液相色谱-质谱法 1 范围 本附录适用于上述液相色谱法检出化妆品中米诺地尔的确证。 2 仪器设备 液相色谱-串联质谱仪。 3 液相色谱参考条件 色谱柱：C18柱 流动相：甲醇-水（70∶30）（含0.1%乙酸、0.02mol/L乙酸铵）。 4 溶液制备 采用流动相稀释制备标准溶液和样品溶液，根据仪器灵敏度选择适当的测定浓度。 5 质谱确证依据 表1 监测离子 质谱类型 母离子[M+H]+/（m/z） 碎片离子（子离子）/（m/z） 离子阱 210 193、164、137、125 三重四级杆 210 193、164、110、84 至少选择两个离子对进行定性确认。阳性结果判断时离子对的相对丰度比的最大允许偏差见下表2。 表2 离子对的相对丰度比的最大允许偏差 相对离子丰度 ≥50% ＞20%~50% ＞10%~20% ≤10% 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 6 质谱图 图1 离子阱质谱米诺地尔对照品一级谱图 图2 离子阱质谱米诺地尔对照品二级谱图 图3 三重四级杆质谱米诺地尔对照品二级谱图