木糖筛选系统在黄瓜转化中应用.pdfVIP

r ， J J 摘 要 随着转基因植物商业化，转基因植物的生物安全性，尤其是转基因植物中的抗性标 记基因，受到了越来越多的关注。因为人们担心这些抗性标记基因能够潜在地流向杂草、 微生物，对环境造成危害，以及植物产生意外的性状，从而引发食品或生态安全问题。 在植物遗传转化系统中，目前应用较为广泛的筛选标记基因主要有两大类：抗生素 抗性酶基因和除草剂抗性酶基因。常用的抗性酶基因包括nptfI基因、cat基因、hpt 基因、bar基因等。转化的细胞可以在含有抗生素和除草剂的培养基中正常生长，因此 利用这些标记基因的筛选体系都可能存在生物安全性问题，因而采用无害的正筛选系统 进行植物遗传转化是基因工程的重要目标之一。 木糖筛选是一种正选择筛选体系，木糖异构酶基因(XylA)是一种安全的标记基因。 我们首先通过七组对照实验确定木糖作为选择剂的最佳浓度。本实验以大肠杆菌XylA 作为选择标记基因，利用木糖作为选择剂获得能够表达带有GUS报告基因的转基因黄 载体，以木糖作为筛选剂，进行黄瓜遗传转化研究。本研究初步建立了农杆菌介导的基 于木糖选择系统的黄瓜转化体系。以黄瓜真叶为外植体，预培养2天，以携带表达载体 的农杆菌LBA4404侵染黄瓜，选择培养基添加1 m∥砌的2ip和lmg／ml的2，4．D，待 的蔗糖，获得的转化效率较高。通过这套程序，我们获得了19．株转基因黄瓜植株，通 过PCR和GUS组织染色，初步证明12株为阳性植株。 关键词：缈lA：aFGF单链抗体；转基因黄瓜；GUS组织染色 I cucumberwith GUS inthis gene sysytem．The vector was plantexpression pX390．ScFv constructedinthis this study．Inprocedure，cucumbercotoledonwereusedfor explant，which was inoculatedwith LBA4404 Agrobacterium the tumefaciens vector． containingbinary Selectionmedium contained1 and1 mg／na2ip mg／rnl2,4．D，1 and1 59／Lxylose 59／L to sucrose，which when changed0．3mg／ml callus obtained 2ip grew．We positive transgenic detect