苜蓿抗逆基因cDNA克隆和转基因烟草功能初步验证.pdfVIP

苜蓿抗逆基因的cDNA 克隆和转基因烟草功能的初步验证 摘 要 逆境胁迫是影响农作物正常生长发育和限制农作物产量的主要因素之一。当植物在 + 高盐环境中生长一段时间后就会积累过量的Na ，引发离子毒害、渗透胁迫而使植物的 + + 新陈代谢紊乱，严重影响植株的生长发育，甚至导致死亡。植物Na /H 逆向转运蛋白主 + 要分布于液泡膜上，负责Na 跨膜运输，是植物抵御盐胁迫的主要方式之一。在干旱胁 迫的环境下，植物通常会在生理、生化代谢途径上发生改变。当植物耗水量大于吸水量 时，植物体内就会出现水分亏缺现象，导致细胞生理干旱。脯氨酸通常以游离状态广泛 存在与植物体中，一般游离状态的脯氨酸含量很低，当在胁迫条件下脯氨酸的含量就会 增加，从而提高对胁迫的抗性。本研究首次从新疆野生黄花苜蓿(Medicago falcata L.) + + 中克隆得到Na /H 逆向转运蛋白基因MfNHX 和脯氨酸合成酶基因MfP5CS ，MfNHX 基 因cDNA 全长为1626 bp ，编码541 个氨基酸，Genbank 登录号为GU265772 ；MfP5CS 基因cDNA 全长2148 bp ，编码715 个氨基酸，Genbank 登录号为GU180149 ，并且MfNHX 和MfP5CS 两个基因与同属的紫花苜蓿和新牧一号杂花苜蓿的同源性都很高。生物信息 + + 学分析结果表明，黄花苜蓿Na /H 逆向转运蛋白属于跨膜运输蛋白，而黄花苜蓿脯氨酸 合成酶不是跨膜蛋白，可能是一种细胞质蛋白。本研究通过农杆菌介导法将新牧一号杂 花苜蓿的xmNHX 基因和xmP5CS 基因转入烟草，获得卡那霉素抗性的转基因植株。利 用 PCR 及 PCR-Southern 杂交检测转基因烟草 T0 代植株，均证明外源xmNHX 基因和 xmP5CS 基因已整合到烟草基因组中并正常转录。试验证明，xmNHX 基因和xmP5CS 基 因都能在逆境胁迫下发挥作用，转基因烟草 T1 代具有一定的抗逆性。在逆境胁迫下， 转基因烟草T 代的长势明显好于对照，且xmNHX 基因在耐盐方面能够发挥较大的作用， 1 xmP5CS 基因则在抗旱方面发挥较大的作用。 关键词：苜蓿；NHX 基因；P5CS 基因；PCR-Southern 杂交；转基因烟草 I cDNA Cloning of Resistance Genes from Alfalfa and Primary Functional Verification of Transgenic Tobacco Abstract Stress is one of the major factors that affect crop growth and production. Plants accumulate excessive sodium irons that cause ions toxicity and osmotic stress then abnormal metabolism if they vegetate in a high ion environment for some time, which have serous effect on plants growth and even result in death. + + The Na /H antiporter protein that mainly locates in vacuole membrane is responsible for the exchange of