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一、考试要求 1．能简述植物组织培养和体细胞杂交技术，掌握它们的原理、过程及关键环节。 2．了解植物繁殖的新途径及作物新品种的培育的具体方法。 3．掌握动物细胞培养的过程和条件、动物体细胞核移植的过程，并了解它们的前景及存在问题。 4．了解有关培养基的基础知识，学会进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 5. 了解培养基对微生物的选择作用，学会进行微生物数量的测定。 6. 理解纤维素酶的种类及作用，学会从土壤中分离出分解纤维素的微生物，了解这类微生物的应用价值。 二、知识整理 1．微生物的类群 概念： 　　　微生物是指形体微小、结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。 酵母菌、霉菌 腐生、寄生 真核细胞结构 真菌界 衣藻、变形虫、疟原虫 寄生、腐生、自养 真核细胞结构 真核生物界 细菌、蓝藻、放线菌 寄生、腐生、自养 原核细胞结构 原核生物界 DNA：噬菌体 RNA：HIV 寄生 主要由核酸和衣壳组成 病毒 举例 生活方式 结构 分类 ２．培养基的成分及类型 ①培养基五大营养素 硝酸氨、氯化钾等 维持细胞和生物体的生命活动 无机盐 构成生物体的主要化合物 水 维生素、氨基酸、碱基等 酶和核酸组成成分，微生物生长不可缺少微量有机物 特殊营养物质 无机化合物：氮、氨、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 为微生物提供氮素营养、合成蛋白质、核酸、含氮代谢产物 氮源 无机化合物：CO2、NaHC O3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等 为微生物提供碳素营养、能源物质，形成代谢产物，构成细胞成分 碳源 举例 功能 ②培养基的配置原则及其种类 a.配置原则 按微生物种类、培养目的选择原料； 注意各种营养物质的浓度和比例；pH要适宜 b.种类 根据微生物的代谢特点，加入某种指示剂化学物质，用于微生物的鉴别 鉴别培养基 加入某种化学物质以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要微生物的生长，用于分离或培养目标细菌 选择培养基 用途 成分明确稳定，用于分离、鉴定 合成培养基 营养丰富、来源广，用于工业生产 天然培养基 化学成分 微生物的分离、鉴定 固体培养基 保藏菌种，观察微生物运动 半固体培养基 工业生产 液体培养基 物理性质 特点及用途 种类 ③培养基的制备流程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 ３．无菌技术 　　①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 　　②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 　　③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火附近进行。 　　④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 　目的：防止实验室的培养物被 外来微生物污染以及避免操作者自身被微生物感染。 ４．消毒和灭菌常用方法 ①灼烧灭菌 ②干 热灭菌 ③高压蒸汽灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子) 灭菌 ①煮沸消毒法 ②巴氏消毒法 ③化学药剂消毒法 使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 消毒 常用方法 区别 5. 微生物接种与菌种的保藏 　　(1)微生物的接种方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，还有斜面接种、穿刺接种等方法。 　　平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，就可以得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。 　　稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，然后 将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 (2)菌种保藏 　　 　　①临时保藏法： 　　将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在4℃的冰箱中保藏。缺点：保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异。 　　 　　②长期保存菌种： 　　采用甘油管藏的方法，放在－20℃的冷冻箱中保存。 　　6.分离土壤中分解尿素的细菌和分解纤维素的细菌 　　①选择培养基 　　选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。 在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。 　培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如