超高效液相色谱-串联质谱法测定原料乳和奶粉中三聚氰胺的含量.pdfVIP

礴 河南畜牧兽医综合版 2009年(第30卷)第4期 超 高效液相色谱一串联质谱法测定 原料 乳和奶粉 中三 聚氰胺 的含量 方忠意，刘素梅 ，宋志超，谭旭信 ，陈 蔷，杜红鸽 ，朱红继 (河南省畜产品质量监测检验中心，河南 郑州 450008) 摘 要：该试验建立 了使用超 高效液相色谱一串联四极杆质谱测定原料乳和奶粉 中三聚氰胺含量的检测方 法 用三氯乙酸溶液和 乙酸铅提取 ．提取液经MCX 固相萃取柱净化后用UPLC—MS—MS进行检测。色谱条件 ： CAPCELLPAK CR1：4柱(2．0mmX100mmi．d．，5 m)，流动相 ：乙腈一0．01mol／L乙酸铵溶液，梯度洗脱流速 O．3 ml／min 采用正 离子模式的电喷雾质谱检测 ．以一级质谱得到的准分子离子m／z126．8作为母 离子 ，进行碰撞诱 导解离(CID)二级质谱 (MS2)分析 ，选择母离子和MS2的碎 片离子 m／z84．9、67．8定性确证 ，提取 m／z84．9离子 质量 色谱峰面积定量。基质标准线性范围为O．01~1．00~g／rnl，检 出限 10Ixg／kg (S／N=10)，原料乳回收率为 82．4％~97．8％．奶粉 回收率为 80．7％~95．7％。 关键词：三聚氰胺 ；LC—MS—MS；原料乳；奶粉 中图分类号 ：$851．34+7．5 文献标识码：B 文章编号 ：1004—5090(2009)04—0007—03 三聚氰胺 (melamine)简称三胺 ，学名三氨三嗪，别名蜜 1．2．2 质谱条件 离子源 ESI(+)；毛细管电压 3．0kV；锥 胺、氰尿酰胺 、三聚酰胺 ，是一种重要的氮杂环有机化工原 孔 电压 30V：离子源温度 110℃；脱溶剂气温度 400~C；脱 料 l|_使用常用的粗蛋白测定方法 “凯氏定氮法”只能测出 溶剂气流量 600L／h：锥孔反吹气流量50I／h 第一重四极 样品的含氮量．不能鉴定是有机氮还是无机氮。由于三聚氰 杆和第二重四极杆的低端分辨率及 高端分辨率均为 15V： 胺无色无味 ，含氮 比例为 66％，易于生产和购买，成本低 ，添 锥孔 电压和碰撞能量见表 2 检测方式为多反应监测 加了三聚氰胺的食品用 “凯 氏定氮法”可测出较高的蛋白含 (MRM)扫描模式，其参数见表 2。 量．从感官上无法鉴别．因而常被不法分子添加进食品和动 表 2 多反应监测扫描模式的参数 物饲料中冒充蛋 白质 大量试验研究表明．哺乳动物长期摄 Parention(m／z)Dauterionm／z)Conevoltage(eV)Collisionenergy(eV) 人大量的三聚氰胺会造成肾脏损伤 [2,33．2007年3月发生于 美国的宠物中毒死亡事件 FDA调查结果认定是中国输入 的小麦蛋白粉和大米浓缩物里含有三聚氰胺 ．2008年9月 1．3 溶液 的配制 份国内三鹿奶粉事件的罪魁祸首也是三聚氰胺。 1．3．1 标准溶液的配制 准确称取三聚氰胺对照品 50mg 1 材料与方法 于50ml容量瓶中。加20％(V／V)甲醇溶液超声溶解 ，放冷 1．1 仪 器与试 剂 至室温后定容 ．配制成含三聚氰胺 1mgm／l的标准贮备 WatersACQUITYUPLC超 高效液相色谱仪 ：Waters 液 ．4℃保存。 MieromassQuattroPremierXE三重四极杆质谱仪 ：配电喷雾 l_3．2 提取液的配制 取 480ml10 L三氯 乙酸溶液 ，加 离子源 (ESI)；Waters固相萃取装置；梅特勒 320型酸度计。 入 20ml22g／L乙酸铅溶液 ，混匀 ，临用前配制。 WatersOasisMCX 固相萃取小柱 (3ml，60mg)：三聚 1．4 样 品的提取 氰胺对