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信号蛋门TOR与杆状病毒感染和昆虫细胞凋亡的关系 论文题目：信号蛋白TOR与杆状病毒感染和昆虫细胞凋亡的 关系 专业：微生物学 硕士生：杨亦 导师：庞义教授 中文摘要 of 雷帕霉素靶蛋白(targetrapamycin，TOR)属于磷脂酰肌醇激酶的相关激酶 kinase-relatedkinase，PIKK)超家族，是一类进化上非常保守 (phosphatidylinositol 的蛋白激酶，广泛存在于各种生物细胞。信号蛋白TOR是磷脂酰肌醇．3激酶 (phosphatidyIinos的l 存活中处于核心地位，在多种因素的活化下参与基因转录、蛋白质翻译起始、细胞 凋亡等多种生物学过程。很多病毒在感染过程中可通过调控宿主细胞 与还参与了肿瘤坏死因子(tumornecrosis D，ActD)等细胞外因子诱导的细胞凋亡。 信号通路，且该通路在杆状病毒感染昆虫细胞以及诱导昆虫细胞凋亡过程中起着重 要作用。为了对鳞翅目昆虫细胞中P13K．Akt信号通路进行较为完整和全面的研究， 本文对P13K．Akt信号通路的下游信号蛋白TOR在杆状病毒代表种——苜蓿丫纹夜 蛾核多角体病毒(Autographacalifomicamultiple 感染Sf9细胞过程中所起的作用进行了研究。同时也对TOR在St9细胞凋亡过程 中所起的作用进行了初步的探索。 信号蛋向TOR与杆状病毒感染和昆虫细胞凋亡的关系 素浓度的升高，被处理细胞的增殖率降低，说明雷帕霉素对St9细胞增殖起到了抑 interference)下调 制作用，且此抑制作用为浓度依赖型。此外，RNA干扰(RNA St9细胞中TOR的表达也能抑制细胞的增殖。表明Sf9细胞中存在信号蛋白TOR。 利用特异性识别磷酸化TOR的抗体进行Westernblot分析表明，AcMNPV感 染导致St9细胞中磷酸化TOR的水平在l hpi(hours 平的磷酸化TOR可持续到18 hpi。结果表明AcMNPV感染Sf9细胞能磷酸化激活 细胞中的信号蛋白TOR。 AcMNPV在Si9细胞中的有效增殖需要TOR。在病毒感染细胞后各时间点利 用雷帕霉素处理细胞抑制TOR后，芽生型病毒(budded body)的产量都显著降低。在2hpi加入雷帕霉素处理细胞，对予代病毒产量的影 响与感染前加入雷帕霉素的相近，说明雷帕霉素并不影响病毒进入细胞。在8hpi 和12 hpi加入雷帕霉素对子代病毒产量的影响逐渐降低。24hpi加入雷帕霉素则不 影响子代病毒的复制。这些结果表明，病毒进入细胞后的早期复制过程对 P13K．Akt-TOR信号通路的依赖性较强，随后逐渐减弱，感染24h后病毒不再依靠 此信号通路进行增殖。Slotblot和Westernblot检测发现当TOR受到抑制后，病毒 DNA合成，以及病毒晚期基因(3豚)和极晚期基因(多角体蛋白)的表达均受到 一定程度的抑制，但病毒早晚期基因(gp64)的表达水平接近。上述结果证明TOR 对AcMNPV在S固细胞中复制具有重要作用。 TOR在调节细胞存活和凋亡过程中起着关键性的作用。利用雷帕霉素抑制 TOR后，杆状病毒或放线菌素D诱导的St9细胞凋亡受到抑制。 关键词：TOR信号蛋白；苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒；细胞凋亡； Ⅱ 信号蛋白TOR与杆状病毒感染和昆虫细胞凋亡的关系 Title：The betweenTOR Proteinand Relationship Signaling Cell BaculovirusInfectionorInsectApoptosis Major：Microbiology