分子发光分析法18369.pptVIP

第3章 分子发光分析Molecular Luminescence Analysis 1 荧光Fluorescence 2磷光Phosphorescence 3 化学发光Chemiluminescence 关键词：激发光谱，荧光光谱，量子产率；荧光光谱的产生、主要影响因素、荧光强度与被测物质浓度的关系；荧光分析仪器；定量分析方法 § 3- 1 概述 一、分子发光分析法及其分类 某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，以光辐射的形式从激发态回到基态，这种现象称为分子发光，在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法 根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类： 光致发光：以光源来激发而发光 电致发光：以电能来激发而发光 生物发光：以生物体释放的能量激发而发光 化学发光：以化学反应能激发而发光 二、分子荧光分析法的特点 1. 灵敏度高 荧光强度随激发光强度增强而增强 灵敏度荧光分析法比分光光度法高2~3个数量级 2. 选择性好 选择不同的激发光波长 选择不同的检测荧光波长 3. 实验方法简单 4. 待测样品用量少；仪器价格适中；测定范围较广 § 3- 2 荧光和磷光光谱法 一、荧光和磷光光谱的产生 具有不饱和基团的基态分子光照后，价电子跃迁产生荧光和磷光 基态分子 价电子跃迁到激发态 二、荧光、磷光与分子结构的关系 了解荧光与分子结构的关系，可以预测哪些物质能产生荧光，在什么条件下产生，以及发射的荧光有什么特征以便更好地运用荧光分析技术，采取一些措施把不发荧光的物质产生荧光，即把非荧光体变成荧光体，弱荧光体变成强荧光体 （一）荧光效率 荧光强度常用荧光量子效率φf 来描述 荧光量子效率 ?f = （二）荧光磷光与有机化合物结构的关系 物质只有吸收了紫外可见光，发生? ? ?*, n ? ?*跃迁，产生荧光 ? ? ?*与n ? ?*跃迁相比，摩尔吸收系数大102~103，寿命短 ? ? ?*跃迁常产生较强的荧光， n ? ?*跃迁产生的荧光弱，但可产生系间窜跃，产生更强的磷光 1. 共轭体系——有较强的荧光 具有共轭体系的芳环或杂环化合物， ?电子共轭程度越大，越易产生荧光; 环越多，共轭程度越大，产生荧光波长越长，发射的荧光强度越强 2. 刚性平面结构—较稳定的平面结构 具有强荧光的分子多数有刚性平面结构 例 1，2 - 二苯乙烯 （三）金属螯合物的荧光 大多数无机盐类金属离子，不能产生荧光；不少有机配体是弱荧光体 或不发荧光，但与Mn+形成螯合物后变为平面构型，就会使荧光加强或产生荧光 例：8-羟基喹啉为弱荧光体，与Mn+— Al3+、Mg2+形成螯合物后，能形成刚性结构，荧光加强 （四）取代基的类型 （1）增强荧光的取代基 —— 有 -OH、-OR、 -NH2、-NHR、-NR2等给电子基团 由于基团的 n 电子（孤对电子）的电子云与苯环上的 ? 轨道平行，共享了共轭 ? 电子，扩大了共轭体系，使荧光波长红移，荧光强度增强 （2）减弱荧光的取代基 ——-COOH 、 -NO2 、-COOR 、-NO、-SH 吸电子基团, 使荧光波长短移，荧光强度减弱 芳环上被F、Cl、Br、I 取代后，使系间窜跃加强，磷光增强，荧光减弱。其荧光强度随卤素原子量增加而减弱，磷光相应增强，这种效应为重原子效应。 （3）影响不明显的取代基 —— -NH3+、-R、 - SO3H等 三、环境对荧光、磷光的影响 1. 溶剂的影响 同一荧光物质在不同的溶剂中可能表现出不同的荧光性质 一般来说，溶剂的极性增强，荧光波长红移，荧光强度增大 2. 温度的影响——低温下测定，提高灵敏度 3. pH的影响 大多数含有酸性或碱性基团的芳香族化合物的荧光性质受溶液pH的影响很大 共轭酸碱对是具有不同荧光性质的两种型体，具有各自的荧光效率和荧光波长 四、荧光强度与荧光物质浓度的关系 五、荧光和磷光分析仪器 （一）荧光分析仪器——主要由光源、单色器、液槽、检测器和读数器组成 1、光源 激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范围宽 荧光光度计中常用高压汞灯和氙弧灯 2、单色器 第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长? ex ，用此激发光激发液池内的荧光物质 ? ex 第二单色器作用：滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长? em。 在