作物抗蚜虫转基因技术与研究.pdfVIP

作物抗蚜虫转基因技术研究 作物抗蚜虫转基因技术研究 姓 名： 李晓明（生物化学与分子生物学） 导师姓名： 彭明 研究员 崔百明 副教授 摘 要 棉蚜是导致世界上农作物产量严重下降的主要害虫之一。成若蚜群集于棉叶背面和嫩 尖上，以针状口器刺吸汁液，由于组织的细胞受到破坏，致使棉叶正反面生长不平衡，叶 片背面卷曲，形成卷叶，植株矮缩，受害棉苗叶发育受阻。而喷施化学杀虫剂严重污染环 境，通过表达毒蛋白来抑制或杀死害虫可能使蚜虫产生抗性。所以寻找一种新型的抗虫策 略既能够有效地抵抗蚜虫，又是安全的，就成为一种迫切的要求。 RNA 干扰是近期发现的一种新的基因调控机制, 它利用RNA 序列匹配, 专一地识别 靶基因, 在转录水平、转录后水平或翻译水平抑制靶基因表达。在农业上RNAi 技术已发 展成为控制虫害、提高作物品质的新方法。与传统转基因手段相比, 这一技术更具选择性 和安全性。 本研究拟尝试通过 RNAi 技术，降解靶基因 mRNA ，抑制棉蚜内源靶基因的表达， 从而达到抑制棉蚜数量的目的。根据已知生物信息学数据，通过RT-PCR 技术从棉蚜中克 隆了AP1 ，Catb5 ，Catb6 ，RPL18 基因，AP1 为网格蛋白基因，Catb5、Catb6 为组织蛋白 酶基因家族的两个基因，RPL18 为核糖体蛋白酶基因。这四种基因都为棉蚜的持家基因， 由于Catb5、Catb6 组织蛋白酶基因缺少3’端，分别对Catb5、Catb6 做了3’RACE，将AP1 ， Catb5 ，Catb6 ，RPL18 基因分别通过正向和反向插入到 pBi35SG12 质粒中，构建了 pBi35SAP1 ， pBi35SC5 ， pBi35SC6 ， pBi35SR18 四个RNAi 载体，通过农杆菌介导的 方法将四个基因导入拟南芥中，经过卡那霉素和PCR 技术筛选出阳性转化子，得到转基 因植株。将同等数量的棉蚜接种到转基因植株和对照植株上，经过15 天的观察，发现C6 和R18 转基因拟南芥上的蚜虫数量逐渐减少，而AP1 转基因拟南芥上的蚜虫数量与野生 型拟南芥上的蚜虫数量先是增加后开始减少，所以初步推断C6、R18 植株起到抗虫作用。 关键词：棉蚜；RNAi ；dsRNA ；拟南芥 I 作物抗蚜虫转基因技术研究 Abstract Aphids are ubiquitous and serious pests that cause substantial lossesto agriculture worldwide by draining plant nutrients,injecting plant elicitors, and transmitting pathogenic viruses . In many cases, the highly specialized mode of aphid feeding causes little apparent damage to the plant. With their stylets, aphids penetrate plant tissues by probing intercellularly through epidermal and mesophyll cell layers and ultimately feed.But when we use insecticide or toxic protein to control A.gossipy , circumstance is destruction.So we need a new technology that can be safe and effective. RNA in