玉米细菌性叶斑病病原菌鉴定与分子检测.pdfVIP

玉米细菌性叶斑病病原菌鉴定与分子检测 摘 要 玉米细菌性叶斑病是指由几类细菌引起的玉米多种叶部斑点病的总称，病原菌种类 和病害症状均表现出多样性。近几年来，该病有逐年加重的趋势，感病品种既有普通玉 米，也有甜糯玉米，据调查，在我国大部分地区均有发生。玉米细菌性叶斑病具有传播 快、发病迅速、控制难度大等特征，已在局部地区开始影响玉米生产，但是国内外对其 的研究却很少。 本论文通过对菌株的致病性测定和培养性状的观察，选择致病性较强、引起病害较 广泛且严重的褪绿斑型症状的病原菌开展研究。通过常规的形态学观察和生理生化鉴 定、全细胞脂肪酸测定和 16S rDNA 序列特征分析，将这类菌株鉴定为巨大芽孢杆菌 Bacillus megaterium 。同时利用已发表的特异引物对Pantoea ananatis 进行分子检测。 利用细菌16S-23S rDNA ITS 通用引物L1/L2 对病原菌B. megaterium 的ITS 序列进 行扩增，得到大小为125 bp 的片段。将所获片段在NCBI 中进行Blast 同源序列检索后， 利用引物设计软件premier5.0 设计出特异性引物BaF1/ BaR1 。该引物只能从目标菌中 扩增出1 条大小为125 bp 的产物，非B. megaterium 的参试菌株均无扩增条带，表明该 引物具有很高的特异性。利用该引物检测B. megaterium 的菌悬液和基因组DNA 的灵敏 4 CFU/mL 和6 pg/ µL，从而建立了B. megaterium 的分子快速检测 度分别达到了3 ×10 体系，在实践中仅用特异性引物BaF1/ BaR1 即可对B. megaterium 进行检测。 从保存的玉米细菌性叶斑病分离物中，将与B. megaterium 和P. ananatis 菌落形态 和培养性状相似的菌株挑选出来，其中用特异引物BaF1/ BaR1 将分离自浙江、海南和 云南的 10 株菌扩增出 125 bp 的特异性条带，鉴定为 B. megaterium ；而用特异引物 PanITS2-1F/PanITS2-1R 将分离自浙江、海南和北京的其他7 株菌扩增出363 bp 的特异 性条带，鉴定为P. ananatis 。 关键词：玉米；细菌性叶斑病；病原菌；巨大芽孢杆菌；菠萝泛菌 I Identification and molecular detection of the causal agent of bacterial leaf spot of corn Abstract Bacterial leaf spot of corn is a class of leaf spot diseases caused by various bacterial species. The pathogens and disease symptoms of the bacterial leaf spots exhibit a wide range of diversity. In recent years, the occurrence of bacterial leaf spot disease is increasing in the fields of normal corn varieties and sweet corn in most corn production regions of China. Bacterial leaf spot of corn has shown the characteristics of fast spread, rapid occurrence, and difficult to be controlled. This disease has impact