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肝癌干细胞分离的研究进展王泉陈涛(三峡大学,湖北 宜昌 443002)
摘要:肿瘤干细胞已经被证实存在于肿瘤组织中,近来发现肝癌中存在肝癌干细胞。肿瘤干细胞被认为是肿瘤的起始细胞,对肿瘤的发生、发展、转移、复发及耐药有着重要作用。因此分离和鉴定肝癌干细胞成为当前研究的热点。本文复习了相关文献,现就肝癌干细胞分离鉴定的研究进展做一综述。
关键词:肝癌干细胞;分离鉴定;CD133;SP;Abstract:Cancer stem cells (CSCs) have been demonstrated in a growing range of epithelial and other solid organ malignancies. And previous experimental and clinical evidence also indicated the existence of liver CSCs. CSCs are defined as a minor population which possesses a prominent ability to generate new tumors that play an important role in the tumor development, metastasis, recurrence and resistance to chemotherapy. So isolation and identification of liver CSCs attract much attention. In this review, we describe the progress on isolation and identification of liver CSCs.
KeyWords: Liver cancer stem cells;Isolation and Identification;CD133CD90;serum-free medium sorting
传统观点认为肿瘤的发生是由于正常细胞基因序列的改变,导致DNA发生突变,从而引起大量幼稚细胞增生,其生长是所有肿瘤细胞共同作用的结果。但近年来肿瘤干细胞理论提出了全新的观点,认为肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是肿瘤发生、发展的基础,与肿瘤的转移、复发、耐药有关。因此分离鉴定出肿瘤干细胞并研究其特征,将为肿瘤的治疗开辟新的路径。原发性肝癌是一种常见的恶性肿瘤,好发于东南亚国家[1,2],而我国是肝癌的高发国家之一,其死亡率仅次于胃癌和食管癌居第三位。目前关于其发病机制仍不清楚。越来越多的证据证明,肝癌组织中存在肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)1 肿瘤干细胞干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的原始细胞,一方面可以通过对称分裂维持自身细胞的数目,一方面又能分化成各种不同的组织细胞[3]。传统观点认为肿瘤的发生是由于正常细胞的基因序列的改变,导致DNA发生突变,从而引起大量幼稚细胞增生,其生长是所有肿瘤细胞共同作用的结果。因此治疗方法主要是通过手术、化疗、放疗等尽量去除所有的肿瘤细胞,但是治疗后仍有复发和转移,效果往往不尽人意。Reya等[4]首次提出了“肿瘤干细胞学说”,认为肿瘤细胞具有异质性,肿瘤组织中存在一种数量较少的干细胞样癌细胞亚群,具有肿瘤始动能力及转移特性,能够自我更新,通过迁移形成肿瘤转移;有多向分化潜能,可分化成肿瘤内任何细胞;有永生性,能保证肿瘤的持续增殖,这种细胞称为CSCs。1997年,Bonnet等[5]从急性淋巴细胞白血病病人体内分离出CD34+CD38-细胞群,仅占肿瘤细胞的5%,但只有这些细胞具有干细胞特性,这是人类首次获得的肿瘤干细胞。近年来,在许多实体瘤中发现了CSCs的存在,如乳腺癌[6,7]、结肠癌[8]、脑胶质瘤[9]等。
2 LCSCs的分离
目前,LCSCs的分选方法有三种细胞(side population cells,)分选法;依赖于细胞表面标志物,使用荧光激活细胞分选法(fluorescence activated cell sorting,FACS)或磁性激活细胞分选法(magnetic activated cell sorting,MACS)分选出具有干细胞性质的细胞亚群;2.1 SP细胞分选法
SP细胞是能依赖细胞膜上的ATP结合蛋白(ABCG2)运载体,将进入细胞核的荧光染料Hoechst33342排出细胞外的一类细胞,利用流式细胞仪可以将这群细胞检测出来。研究发现,在正常组织中SP细胞表达的基因与干细胞相似,具有很强的自我更新和多向分化的潜能。近年来,在白血病、脑肿瘤、肺癌、胰腺癌、
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