不同方法测定HPMCP微胶囊蛋白质包裹量影响因子的研究.docVIP

不同方法测定HPMCP微胶囊蛋白质包裹量影响因子的研究 摘要 本文采用复相乳液法制备HPMCP的BSA微胶囊，研究常用蛋白质定量方法考马斯亮蓝染色法、福林-酚法、紫外吸收法对测定HPMCP微胶囊蛋白包裹量受壁材、乳化剂、亲水性保护胶体及样品pH的影响。结果得到制备的微胶囊呈圆形或椭圆形，没有粘结在一起的现象，三种方法中福林-酚法影响程度最小，适合测定HPMCP蛋白微胶囊的包裹量。 关键词：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯，微胶囊，包裹率，考马斯亮蓝染色液，福林-酚试剂 Study of using different means to mensurate envelopment rate of protein of HPMCP microcapsuals Abstract: This paper studied the means of diphase emulsion to make Bovine Albumin microcapsuals with Hydroxy proprl methyl celluloxe phthalate, effection of the wrap material, reagent of emulsification, hydrophilic colloid of protection and pH of testing protein on the Bradford protein assay, the Folin-phenol assay and UV-absorbing methods for testing the envelopment protein capacity of microcapsules. The end that shape of microcapsules was orbicular or Elliptic and no conglutination, the best means for testing envelopment protein capacity of microcapsules is the Folin-phenol assay because it has the least effection. Keywords: Hydroxy proprl methyl celluloxe phthalate, microcapsuals, rate of envelopment, Coomassie blue protein dye, Folin—phenol reagent 羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(Hydroxy proprl methyl celluloxe phthalat)简称HPMCP,是种性能优良的肠溶性药用辅料，分别于1981年与1983年起收载于日本和美国药典[1]。其可以通过复相乳液法[2]、喷雾干燥法[3]等可以制备肠溶性微胶囊。用作肠溶性微胶囊壁材比溶解PH值低，较国内广泛使用的丙烯酸酯，具有更好的柔韧性，且溶解速度较快，可以确保制剂具有较高的生物使用度[4]。比邻苯二甲酸醋酸纤维素（CAP）具有更高的储藏稳定性，仓储条件下1200天不变质，而CAP容易受片心药物酸碱度的影响，溶解速度降低[5]。由于本身具有可塑性，因此在成膜时不加增塑剂或者很少量的增塑剂[6]，并且安全、无毒[7]。因此是一种理想的肠溶性材料。本研究采用复相乳液法制备了HPMCP蛋白微胶囊，为了研究包裹量是否受药物辅料的影响选择了三种常用的蛋白质定量检测方法，寻找受干扰最小的检测方法，为HPMCP蛋白微胶囊包裹量或者含量的测定提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料和试剂 材料和试剂：羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、蓖麻油、明胶、羧甲基纤维素钠、壳聚糖 无水乙醇、丙酮、考马斯亮蓝G-250、福林-酚试剂系列(天津博美生物科技公司)、牛血清白蛋白 仪器：UV-2550紫外分光光度计、FSH-A2型可调告诉匀浆机 1.2 试验方法 1.2.1HPMCP肠溶微胶囊的制备 参照文献[3,8]中复相乳液法，制备BSA溶液的HPMCP肠溶微胶囊.选用蓖麻油作乳化剂，壁材溶剂为丙酮/乙醇=1,搅拌转速10000r/min,乳液Ⅱ和亲水性的保护性胶体比列为1:3. (1) 用0.75%浓度的羧甲基纤维素钠溶液作保护性胶体制备微胶囊 用0.75%浓度的明胶溶液作保护性胶体制备微胶囊 （3) 用0.5%浓度的壳聚糖溶液作保护性胶体制备微胶囊 待微胶囊形成后，离心收集微胶囊，洗涤三次，光学显微镜下观察形态。 1.2.1 Bradford法检测HPMCP微胶囊蛋白质包裹量的影响 参照文献[9]进行考马斯亮蓝测定方法的步骤进行操作。 （1） 壁材浓度对考马斯亮蓝G-25