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生物化学实验技术教学大纲 课程名称：生物化学实验（技术） 英文名称：Biochemistry Experiment 课程编号：143103040 课程总学时：36 课程学分：1.5 适用专业：制药工程、生物工程、食品工程、生物技术、食品质量与安全 课程分类：必修 课程性质：学科基础课 先修课程：生物化学、有机化学 一、制定本大纲的依据 本教学大纲依据天津科技大学《本科生课程教学大纲编制规范》以及生物化学教学大纲的要求制定。 二、本实验课程的具体安排 实验项目的设置及学时分配 序号 实验项目名称 内容简介（50字左右） 实验学时 实验要求 实验类型 实验类别 每组人数 1 离子交换柱层析法分离混合氨基酸垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质聚丙烯酰胺凝胶蛋白酶活力的测定植物组织中的提取和的提取糖酵解中间产物的鉴定 四、学生应达到的实验能力与标准 通过实验课的教学，使学生掌握比色、层析、电泳、离心等生物化学基本实验方法的原理和操作技能，学会选择正确的方法进行生物材料中多种物质的分离、提纯及鉴定，培养学生严谨的科学态度分析、解决问题的能力。同时通过实验加深学生对生物化学基本理论的理解。 通过实验训练，达到巩固和提高实验技能与常用测试仪器设备的使用能力，培养学生综合运用所学课程知识，学会观察思考和分析实验过程的能力，为今后从事科学研究工作打下基础，培养学生理论联系实际作风，实事求是，严肃认真的科学态度和良好的工作作风，通过此环节，可提高学生查阅文献能力，综合运用所学知识，分析解决问题能力，提高实验操作与常用仪器设备使用技能。 基本要求： 1.进入实验室的学生必需严格遵守实验室规则； 2.复习有关课堂讲授的理论知识； 3.根据实验教程，认真预习实验教程； 4.明确实验目的，掌握实验设计的原理； 5.认真对待每一次实验，真实记录实验结果并完成实验报告。 除此之外，鼓励学生自行设计实验或参与实验教学改革，思想活跃，积极与老师交流意见。 五、讲授实验的基本理论与实验技术知识： 第一部分 生物化学实验技术原理 蛋白质（酶）、核酸的分离纯化 引言 第二节 蛋白质（酶）、核酸分离纯化的前处理 二、细胞的破碎 三、细胞器的分离 四、提取 （一）蛋白质（酶）的提取 （二）核酸的提取 第三节 分离纯化 （一）粗分级分离 1、盐析 2、等电点沉淀 3、有机溶剂法 1.层析法 2.电泳法 3.超离心法 二、核酸的分离纯化 （一）粗分级分离 第三节 纯度鉴定 层析技术 一、层析法的基本原理 二、层析法的分类 第一节 吸附层析技术 一、基本原理 二、吸附剂种类 三、薄板层析操作要点 第二节 分配层析技术 二、层析操作要点 第三节 凝胶过滤层析技术 二、凝胶的种类和性质 （一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex） （三）聚丙烯酰胺 （四）聚丙乙烯凝胶（Styrogel） （一）生物大分子物质的分离纯化 （二）分子量的测定 （三）分级分离 （四）溶液浓缩 （五）平衡常数的测定 （六）细胞及颗粒的分离 四、柱层析操作要点 第四节 离子交换层析法 第五节 亲和层析法 第六节 高压液相层析特点 第一节 离心技术概论 一、离心机的分类 二、一般制备离心与制备性超离心技术 第二节 制备性超离心技术 一、离心力和相对离心力 二、转子、离心管及选择 （一）离心管 （二）离心管帽 （三）转子及选择 三、离心技术类型 （一）差速离心法 （二）等密度梯度离心 （三）速率—区带离心 （二）取代法 （三）虹吸法 （四）切割法 五、梯度的分析 第四章 电泳技术 引言 一、概念 二、发展 三、分类 第二节 电泳的基本原理 第三节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、概述 二、聚丙烯酰胺凝胶的制备 （一）化学聚合 （二）光聚合 三、凝胶浓度和交联度与孔径大小的关系 四、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 第四节 琼脂糖凝胶电泳简介 第五节 免疫电泳简介 基本要求： 掌握比色、层析、电泳、离心等生物化学基本实验方法的基本原理 学会选择正确的方法进行生物材料中多种物质的分离、提纯及鉴定 通过实验技术理论学习加深学生对生物化学基本理论的理解 第二部分 实验项目 (32学时) 实验一：离子交换法分离氨基酸 基本内容： 树脂的处理、装柱、平衡、制备混合样、加样、洗脱分离、洗脱液的收集、显色鉴定，绘制洗脱曲线。 基本要求： 掌握离子交换基本原理和离子交换分离氨基酸的操作过程。 实验二：垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质聚丙烯酰胺凝胶 实验三：马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验 基本内容： 盐析法马铃薯多酚氧化酶的制备，酶的催化反应性质，变性剂和抑制剂、温度、时间、底物浓度、酶浓度、pH等因素对酶活性的影响 基本要求： 掌握