氟对体外培养成骨细胞骨钙素基因表达的影响.pdfVIP

中文摘要 为了探时氟化物对机体骨骼代谢的影响和骨钙素(OCN)在氟中毒所致骨相损害中的 作用，本研究采取酶完全消化法或酶半消化植块培养法，以小鼠(初生24h)和胎羊(2～3 月龄)头盖骨为材料分离成骨细胞，通过形态观察(Giemsa染色)、碱性磷酸酶(ALP)和 钙化结节(VonKossa)染色来鉴定细胞。并进行传代培养；从体外培养的成骨细胞提取总 RNA，经RT-PCR扩增出OCN基因序列，经克隆、蓝白斑筛选、质粒的限制性内切酶酶切 鉴定后，进行测序和生物信息学分析；利用实时荧光定量PCR米检测不同浓度NaF对体外 培养成骨细胞OCN基因表达的影响。结果表明： mM I．在10 B．甘油磷酸钠和509∥mL维生索C诱导培养下，分离的小鼠、绵羊成骨细 eDNA少3个 胞确实表达OCN基因。绵羊OCN基因编码区全长297bp，较人和牛的OCN 绵羊OCN的测序结果已被GeneBank收录，登录号为DQ418490。 Nff组分别在第7d和第1ld达高峰；高峰过后OCNmRNA的表达急剧减少，之后则呈缓 慢下降趋势，至19d仍有表达。除了第7d，5×104m