家蚕与野桑蚕CYP6B29基因的克隆、序列分析及原核表达.pdf

家蚕与野桑蚕cyP卯猡基因的克隆、序列分析及原核表达 中文摘要 中文摘要 细胞色素P450单加氧化酶系在生物体对外源化合物的代谢和内源化合物的 调节都起着非常重要的作用，许多证据表明昆虫杀虫剂抗性的产生与单加氧化酶 系介导的代谢反应有关，其关键组份细胞色素P450作为终端氧化酶能氧化多样 的底物。 以家蚕基因组P450序列为依据，设计了一对引物，采用RT-PCR方法分别以 对分子质量约为58kD，等电点分别为8．29和8．49。同源EB较发现两者有12个碱 基、6个氨基酸的差异，核苷酸和氨基酸同源性分别达到99．2％和98．8％。经与已 知P450的6B亚族其它几乎所有成员氨基酸同源比对发现，家蚕和野桑蚕 CyP卯刀基因与美洲棉铃虫CYP6827同源关系最近，同源性分别达到60．5％和 61．3％。P450的6B亚族的许多成员与昆虫对杀虫剂的抗性和植物毒素的代谢相 关，因此推测其可能与昆虫抗性相关。 将家蚕和野桑蚕CYP6829基因分别克隆进原核表达载体pET-28a，转化到大 肠杆菌BL21细胞中，经1mmol／LIPTG诱导蛋白质表达。SDS．PAGE电泳分析 表明在约62 菌和空pET-28a转化BL2