感受态细胞制作和转化效率研究.doc

天津农学院 毕 业 论 文 中文题目:感受态细胞制作和转化效率的研究 英文题目:Establishment of Competent Cells and Analysis of Transformation Efficiency 学生姓名 于晓猛 系 别 动物科学系 专业班级 2010 级 动物医学 专升本 班 指导教师 李吉霞 成绩评定 2012年6月 目 录 1 前言 1 2 材料与方法 2 2.1 材料与仪器 2 2.1.1 菌种及质粒 2 2.1.2 培养基 2 2.1.3 仪器设备 2 2.2方法 2 2.2.1制备感受态细菌 2 2.2.2 DNA重组子的转化感受态大肠杆菌 3 2.2.3质粒DNA提取 5 3结果 8 3.1 感受态细菌转化效率观察 8 3.2 质粒提取结果观察 10 4 讨论 11 4.1 DNA 重组受体系统 11 4.2感受态细胞的制备 11 4.3 质粒转化效率 12 参考文献 13 致 谢 14 附录1：外文文献原文 15 附录2：外文文献原文译文 20 摘 要 质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞是分子克隆的关键步骤，是基因克隆以及DNA文库构建等研究中频繁使用的一项重要的常规操作。本研究通过复苏和扩增DH5α细菌，每50ml菌液用10ml预冷的0.1mol/L的CaCl2重悬，冰浴30min。于4℃，离心回收。每50ml初始培养物用2ml用冰浴的0.1mol/L的CaCl2重悬，100ul/份，-4℃放置24 h。转化流程100ul感受态DH-5α+ 5ul冰上放置30min2 ℃,热激90冰浴2min400ul LB培养基37℃,50r/min振摇45min取200ul涂布于含Amp琼脂板7℃倒置培养12~16h。随机选择阳性克隆，用LB液体培养基进行扩增，然后按照质粒提取试剂盒操作说明提取质粒ABSTRACT It is a key step for Plasmid transformed into Escherichia coli cells in the molecular cloning. The important routine operations are frequently used in the study of gene cloning and DNA library construction. In this study, recovery and amplification of DH5α bacteria, per 50 ml bacterium fluid with 10 ml precooling 0.1 mol/L of CaCl2 resuspended ice-bath 30min. In 4℃,centrifugal recovery. Initial culture of each 50ml ice bath 0.1mol / L CaCl2 resuspended with 2ml. 100ul/part,The transformation flows are as follows: Firstly, the operator puts the100ul competent of DH-5α and 5ul PCI-Neo-hTERT on the ice for 30 minutes, keeps the temperature at 42 degrees, heats it for 90 seconds and ice-bathes it for 2minutes, then adds 400 ul LB culture and shakes out it at the speed of 50 rounds per minute for 45 minutes at the temperature of 37 degrees. Secondly, the operator takes out 200ul on the agar plate with Amp, then converts and cultures it for 12 to 16 hours at the temperature of 37 degrees. Then nex