物理技术与方法在蛋白结构与功能研究中应用.pdfVIP

∗ 物理技术与方法在蛋白结构与功能研究中的应用 . 朱 杰 孙润广 陕西师范大学物理学与信息技术学院生物物理研究室 西安 710062 摘 要：现代物理技术与方法的发展为蛋白分子的研究提供了丰富而有效的手段。首先强调了技术与科学 发展的辩证关系；介绍了在蛋白分子研究中的常用物理技术与方法如质谱技术、核磁共振技术、同步辐射 X 射线衍射技术、红外光谱和紫外光谱技术、差示扫描量热技术的物理原理及其在大分子研究中的应用现 状，并重点介绍了一些新兴的非常规研究手段诸如原子力显微镜、激光光镊技术的特点及其在蛋白研究中 的最新应用和研究成果；通过对比诸多技术与方法近年来在国内外研究中的进展情况，对各种技术与方法 的优缺点进行了阐述；综合有效地运用这些仪器是必需的，但突出新技术与新方法更能代表这一学科发展 的先进性。 关键词：物理技术与方法；蛋白；结构与功能研究；原子力显微镜；激光光镊技术 中图分类号：O753.2 文献识别号：A 从细胞分裂到细胞运动，从生物代谢到免疫，已知的生物功能没有一个是离开蛋白能实 现的。基因是生物细胞中的遗传物质，但是必须经蛋白形式表达出来后才能显示出生物的各 种遗传性状。一个典型的细胞可能含有 10 万种左右不同的蛋白，在细胞的生命中每一种蛋 白都有其自己的使命。因此，蛋白的研究在生命科学中是至关重要的。 从 20 世纪 50 年代以来，蛋白结构的研究受到物理学家、化学家、生物化学家和分子生 物学家的高度量视，并取得了丰硕的收获。现已有十万多种蛋白的一级结构被测定出来，各 种生物学的研究还会大大丰富蛋白一级结构的数据库。由于x射线晶体学、核磁共振及扫描 探针显微镜等技术的发展，蛋白三维结构解析的数量呈指数增长，目前已有万余种蛋白的三 维结构测定达到了很高的分辨率，其中包括许多重要的蛋白或蛋白复合物，如细菌光合反应 中心、细菌视紫红蛋白、线粒体ATP合成酶等[1-28] 。这些蛋白三维结构的解析对阐明许多蛋 白的功能以致一些生物学的重要问题的分子机制发挥了重要作用，这充分体现了现代物理技 术与方法在推动生命科学发展中的重要地位。 本文主要介绍了研究蛋白结构的各种物理技术与方法诸如光谱学、质谱学、波谱学 (核 磁共振) 、x 射线晶体学、原子力显微镜、激光光镊及差示量热扫描等技术的物理原理及其 在蛋白结构与功能研究中的应用。 1.质谱技术与方法 质谱方法(Mass Spectroscope,MS)是通过正确测定蛋白质分子的质量而进行蛋白质分子 鉴定、蛋白质分子的修饰和蛋白质分子相互作用的研究。质谱仪通过测定离子化生物分子的 质荷比便可得到相关分子的质量。但长期以来，质谱方法仅限于小分子和中等分子的研究， 因为要将质谱应用于生物大分子需要将之制备成气相带电分子，然后在真空中物理分解成离 子。但如何使蛋白分子经受住离子化过程转成气相带电的离子而又不丧失其结构形状是个难 题。20 世纪 70 年代，解吸技术的出现成功地将蛋白分子转化成气相离子。尔后快原子轰击 与其紧密相关的溶液基质二次离子质谱法使得具有极性的、热不稳定的蛋白分子可经受住电 离过程。但这些方法仅限于 10kD 以下蛋白分子的研究。80 年代电喷雾电离(ESI)和软激光解 吸(SLD) 电离技术的发展则使得质谱方法应用于高分子量蛋白分子的研究[2]。 ∗基金项目:国家自然科学基金资助项目(No; 教育部科学技术研究重点项目(No.104167) 作者简介：朱杰(1980- )男,土家族,湖南张家界人,硕士,助研,陕西省物理学会员,主要从事分子生物物理 与理论生物物理研究。 1 电喷雾电离(ESI)原理可按电荷残留模型予以描述，带电液滴蒸发，液滴变小，液滴表 面相斥的静电荷密度增大。当液滴蒸发到某一程度，液滴表面的库仑斥力使液滴爆炸。产生 的小带电液滴继续此过程。随着液滴的水分子逐渐蒸发，就可获得自由徘徊的质子化和去质 子化的