家鸡CHD1基因PCR快速性别鉴定方法的建立及其在早期鸡胚中的应用.pdfVIP

家鸡 CHD1基因PCR快速性别鉴定方法 的建立及其在早期鸡胚中的应用 王嘉力，贾存灵 ，苏利红，魏泽辉 (西北农林科技大学动物科技学院，陕西 杨凌 712100) 摘 要：本试验 以优化 PCR条件 ，建立快速性别鉴定方法为 目的，从 家鸡雏鸡血样、鸡胚羊水 和尿囊液 中获得 DNA进行性别鉴定。通过对家鸡的两个性别鉴定候选基 因CHD1和 XhoI重复片 段进行 PCR扩增引物筛选和反应体系的优化。结果显示CHD1基 因PCR法可稳定、准确地用于鉴 定家鸡性别，该体系经改进和优化后，缩短 了鉴定时间，提高了鉴定的稳定性和准确性。在此基础 上利用 12．5日龄鸡胚羊水和尿囊液建立 了早期胚胎的性别鉴定体系 该方法为家鸡早期胚胎性别 鉴定批量化的快速操作提供 了可行的依据，同时也为鸟类性别决定机制的研究奠定了基础。 关键词：CHD1基 因；鸡胚 ：性别鉴定 中图分类号：$831．2 文献标识码：B 文章编号：1673—1085(2009)12—0003—05 鸟类是生物系统进化上的一个重要类群。其性 能够鉴定样本的性别l7】。ATP5A1基因在鸟类 w、z 别鉴定对鸟类性别分化机制的研究具有非常重要 染色体上以不同形式的序列出现 ，将染色体进行 的意义ll12_。家鸡(Gallus．gallusDomesticus)是家禽生 酶切并电泳后 ，通过基因中被称作 PMgl的序列作 产中常见的物种，又是鸟类进行基础研究的模型动 为探针进行原位杂交，会产生不同条带，进而区分 物 ．因此，对家鸡和早期鸡胚进行性别鉴定具有重 性别l8l。EE0．6序列仅存在于家鸡的w染色体 ，根 要经济价值和科研价值。 据该序列扩增条带的有无对家鸡和其他一些鸟类 在多种性别鉴定方法 中，PCR方法 以其采样 的性别进行鉴定9【1。 量少 、易于取材 、不受样本发育的限制 、操作简便 本研究参照家禽性染色体上可用于性别鉴定 等特点而具有明显的优越性。目前，可用于鸟类性 基因的相关文献，选定 CHD1基因片段和 XhoI位 别鉴定的候选基因包括CHD1、ATP5A1、假基因序列 点重复序列作为主要 目的基因，通过对PCR体系 EE0．6和XhoI重复序列等。鸟类的CHD1基因位于 引物组合和反应程序的优化，旨在获得可用于家鸡 性染色体上 ，在非平胸总 目中有两个 同源拷贝 性别鉴定的稳定 PCR体系，为确立能广泛应用于 CHD1一W 和 CHD1一Z，其 中CHD1一W 为 w 连锁 ． 家鸡及早期鸡胚性别鉴定 的最适方法奠定基础。 CHD1-Z为z连锁 。CHD1一W 和 CHD1一Z的外显 1 材料方法 子序列和大iJ,4~H似 ，内含子大小却有很大差别．通 1．1 试验材料 家鸡血样及孵化用种蛋均购 自西 过引物设计扩增出长度不同的片段来区分样本性 北农林科技大学试验农场 。60只(公母各半)已具 别。XhoI位点重复序列是鸟类W 染色体上一段 有繁殖能力的成年鸡血样通过翅静脉采血获得。48 特异性序列_61，通过对该序列进行PCR扩增其产物 只初生雏鸡血样通过心脏采血获得 ，然后解剖雏鸡 收稿 日期 ：2009-09-16 观察性腺发育，判断其性别。血液样本均用ACD抗 基金项 目：国家 自然科学基金项 目(编号 凝，利用酚仿抽提法提取基因组 DNA。 通讯作者：魏泽辉 (1974一)，男，讲师，博士，研 究方向：动 从 100个孵化至 12．5d的鸡胚 中随机选取 60 物遗传育种与繁殖 E—mail：weizehui7848@163．con