1IL-1、TNF-α基因多态性与汉人Alzheimer病的相关性研究.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 电泳仪 北京六一仪器厂 PCR扩增仪(PTC一9600) 美国PE公司。 紫外凝胶图象分析系统GDS7500(UVP)德国 二、 方法 2．1基因组DNA提取 采用低渗溶血、常规酚一氯仿法提取白细胞基因组DNA(见附录2)。 2．2 apoE基因型检测 25nmaol／L 10XPCR反应缓冲液；1．59l PCR反应体系为259l，O．5一IggDNA模板；2．59l 2mmol／Ld DNA MgCL2；2．51alDMSO；lgl 聚合酶2U。PCR反应程序为：960C5min，30周期(94。CImin，63。C50s，72。C1min)， 720C10min。取PCR产物(292bp)(图1)109I，加5U 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离酶切产物，银染并观察、摄影。其消化后的基因产物有6种 2．3 IL一1 d(-8890／T)基因型检测 25 10XPCR反应缓冲液：39l CATO一3：PCR反应体系为409l，O．5—199DNA模板：49l mmol／L 2mmol／L DNA聚合酶 MgCL2；2p_l dNTPs；10pmol／L上下游引物各29l；Taq 40s，56。C40s，72。C50s)，72。C10 1．5U。PCR反应程序为：960C5min，40周期(940C min。取PCR产物(99bp)(图3)159l，加5U 性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离酶切产物，银染并观察、摄影。其消化后的基因产物有3种基 bp、83bp、16bp三个片断是杂合予基因型C／T。(图4)。 2．4 I L一1RaVNTR检测 应体系为209l，0．5—11．tgDNA模板；2ul10XPCR反应缓冲液；19l DNA聚合酶1U。PCR反应程序为： gl2mmol／IxtNTPs：10pmol／L上下游引物各19l：Taq 950C4min，30周期(940C 2．5 TNF—Q(-308A／G)基因型检测 山西医科大学硕士学位论文 10XPCR反应缓冲液； ATTCCG一3：PCR反应体系为409l，0．5--199DNA模板；49l 25mrnol／L 2nlnlol／L DNA聚 3肛l MgCLz29l dNTPs；10pmol／L上下游引物各29hTaq 合酶1．5U。PCR反应程序为：94。C3min，30周期(94。C 8min。取PCR产物(107bp)(图6)159l，加5U 性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离酶切产物，银染并观察、摄影。结果有三种基因型：只有107 个条带为杂合子G／A(图7)。 2．6 统计学方法 and 基因频率及等位基因频率以百分率(％)表示，组间比较用f检验。用Cochran’S Mantel—Haenszel 检验。全部材料采用SPS