1nm23-H-%2c1-和PCNA在喉鳞状上皮癌中的表达及其临床意义.pdfVIP

材料与方法 一、研究对象： 1．标本收集： 选择2000年1月一2005年12月在延边大学医院手术切除的喉鳞癌 病理标本50例：男45例、女5例，平均年龄61岁，全部标本经10％中性 福尔马林固定，常规石腊包埋，行5um厚的连续切片。 2．主要试剂： 鼠抗人nm～23H。单克隆抗体、鼠抗人PCNA单克隆抗体和通用型 SPkit均购自北京中山公司，工作液浓度均为1：80。试剂盒包括 试剂1(蓝色液体)：封闭用正常羊血清工作液，试剂2(黄色液体)： 标记链霉素卵白素工作液(S呐／HRP)。 3．实验仪器设备 ICARAi 1)石蜡切片机：LE 2135(德国产)。 2)光学显微镜：OLYMPUS(日本产CH)， 3)真彩色病理图像分析系统：CMIAS系列，北京航空航天大学产： 4)快速生物医学微波炉：cD—t型，上海创大科技有限公司产品。 二方法 1．免疫组化染色方法 采用免疫组化S-P法进行染色，具体步骤如下： 1)石蜡切片常规脱蜡至水； 2)蒸馏水冲洗，PBS浸泡5分钟(如需采用抗原修复在此步骤后进行)； 3)3％H：0。去离子水(五色液体)孵育5—10分钟，以消除内源性过氧化 物酶活性； · 4)滴加试剂A(蓝色液体)室温孵育10一15分钟、倾去勿洗： 5)滴加适当比例稀释的一抗37。C孵育2’3小时或4。C过夜； 6)PBS冲洗，3分钟×3次； 7)滴加试剂B(黄色液体)，室温或37。C孵育lO一15分钟； 8)PBS冲洗，3分钟×3次； 9)滴加试剂C(橙色液体)，室温或37。C孵育10一15分钟； 10)PBS冲洗，3分钟×3次； _11)、显色剂显色(DAB或AEC)； 12)自来水充分冲洗； 13)如果需要，可进行复染，脱水、透明； 14)选择适当的封片剂封片； 2，结果的判断： nm23一H。阳性在癌细胞的胞浆、胞膜上着色，以胞浆为主，呈棕 黄色颗粒。PCNA阳性在细胞核内着色，呈棕黄色颗粒，阳性细胞弥 散分布，近基底层阳性细胞较多，染色较深；癌旁粘膜上皮细胞也呈 阳性表达，由基底层向上阳性细胞逐渐减少。阳性细胞15％为阴性， 15％以上为阳性。 3．统计学分析：采用SPSSll．0统计软件进行确切概率法处理。 结 果 I．按WHO喉癌的病理分类标准进行组织学分级，50N喉鳞癌中大多数 为高分化鳞癌3l例、中分化鳞癌15例、低分化鳞癌4例(见图1)。 2．临床分期：TNM分期结果，50例喉鳞癌中T．级11例、T：级23例、L 50 级12例、L级4例；临床分期中I’II期为30例、111’IV期为20例； 例中有颈淋巴结转移的8例，无淋巴结转移的42例。 3．免疫组化染色结果：nra23一H。基因蛋白表达主要位于细胞浆，呈棕 黄色颗粒，偶可见细胞核着色。PCNA阳性染色位于细胞核内，阳性 细胞弥散分布，近基底层阳性细胞较多，染色较重。癌旁粘膜上皮也 呈阳性表达，由基底层向上阳性细胞逐渐减少。 i)喉鳞癌中nra23一H。表达与临床病理特征的关系 nm23一H．蛋白在喉鳞癌中表达阳性率为68．O％，喉癌旁组织为 喉鳞癌的病理分化程度无显著性差异、(0．05)但与临床分期、TMN 分期和淋巴结转移显著相关(均P0．05)，见下表1、2，图2。 阴性(％) 阳性(％) 病理分化程度 高分化 3I 8(25．8)23(74．2) 中分化 15 5(33．3) 10(66．7)3．96 0．05 低分化 4 3(75．O) 1(25．0) 临床分期 I—II 30 3(10．0) 27(90．0)16．68 0．05 Ili-IV 20 13(65．0)7(35．0) Tl ll 1 9．1) 10(90．9) T2 23 4 17．4) 19(82．6)17．230．05 T3