淋巴管内皮祖细胞的分化及其生物学特征.pdf

复日大学硕士毕业论文 ● 中文摘要 目的 VEGF—C诱导向淋巴管内皮细胞分化过程中细胞表面形态、内部结构和特征性 抗原标志物等生物学特征的变化，探讨淋巴管内皮祖细胞向内皮细胞分化的机 制。方法从脐静脉中采取脐带血，用Percoll密度梯度离心法分离单形核细胞， 再用抗VEGFR．3抗体标记，然后用流式细胞仪分选VEGFR．3+内皮祖细胞。用 含有15％FBS、100IU／mL青霉素和100 mg／L链霉素的DMEM培养液对分选 细胞向内皮细胞分化。在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化。在扫描电镜 和透射电镜下观察细胞表面和细胞内超微结构的变化。在共聚焦激光扫描显微 镜下观察特征性标志物的表达变化。结果从脐带血中分选出的VEGFR．3+内 ● 巴管内皮祖细胞呈圆形或椭圆形，胞质中含有较多的线粒体和粗面内质网。这 两种细胞器的断面面积和与细胞质的面积比约为3％。经VEGF．C诱导后2d， 细胞呈梭形，出现头部和尾部。头部较宽，从头部伸出板状伪足和数个丝状伪 足。丝状伪足呈锥状，长短不一。诱导后7d，多数细胞更加伸展。从细胞头部 伸出宽大、扁薄的板状伪足，从板状伪足伸出许多丝状伪足。丝状伪足长约为 3～5I．tm，排列密集而规则。板状伪足表面可观察到散在的微绒毛，长约1．5～2 d的细胞细胞质中含有更 pm。与刚分选出的淋巴管内皮祖细胞比较，诱导后7 丰富的线粒体和粗面内质网。这两种细胞器的断面面积和与细胞质的面积比约 ● 为9％。胞质中出现许多吞饮小泡。祖细胞标志物CDl33表达减弱。经VEGF．C 诱导后14 d，细胞体积变大，呈梭形或多边形，呈现内皮细胞的形态特征，细 胞和细胞之间相互连接，呈单层排列。细胞伪足减少，表面可见许多散在分布 的细胞小凹和微绒毛。胞质中可观察到有膜包被的Weibel．Palade小体。细胞表 达淋巴管内皮细胞特异性标志物LYVE．1和5．核苷酸酶，CDl33表达消失。结 胞。在淋巴管内皮祖细胞向淋巴管内皮细胞分化过程中，细胞的表面形态、内 部结构和抗原标志物发生了一系列特征性的变化。 l关键词】淋巴管内皮祖细胞；VEGFR一3；VEGF．C；淋巴管内皮细胞：脐 带血 ● 复巨大学硕t毕业论文 ● ABSTRACT To the ofthe andmakers objeetive investigatechangesshape，ultrastructures ofVEGF-C·inducedCD34+／CDl endothelial 33+／VEGFR-3+lymphaticprogenitor fromumbilicalcordbloodand themechanismsof cells(LEPCs)isolated explore cord LEPCsdifferentiationtoward endothelialcells．MethodsUmbilical