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定量分析方法 工作曲线法 标准加入法 测定条件的选择 线性范围 防止自猝灭现象的发生。 A 0.05, IF ∝ c 选择合适的激发波长和荧光波长 §4 荧光分光光度计 问题：与紫外-可见光分光光度计相比,它在构造上有哪两点不同?为什么要这样? 光源 要求强度大,适用波长范围宽。目前常用氙弧200-800nm范围内连续发光。 样品池 低荧光材料。如石英 检测器 荧光的强度通常较弱,故要用高灵敏度的检测器。如光电倍增管 单色器 两个单色器均采用光栅来分光 * * 主要内容 荧光的产生 荧光效率与化学结构的关系 荧光光度法的定量依据 荧光光度计 应用 磷光分析法 化学发光分析 第三章 分子发光分析法 §1 荧光的产生 荧光: 以辐射驰豫的形式回到基态时的发射光 在分子荧光分析中，常以紫外光及可见光区的辐射作为激发能，所发生的荧光则多在可见光区 问题： 分子荧光光谱是连续光谱吗? 分子荧光的波长比吸收的入射光的波长要长吗? Stock荧光 Stock荧光 共振荧光 l激发 = l荧光 §3.2 荧光效率与分子结构的关系 一. 荧光效率 (荧光量子产率) φF越大，化合物的荧光越强。 有分析应用价值的荧光化合物, 其荧光量子产率通常在 0.1～1 之间 φF = 发射的光子数 吸收的光子数 kf kf + Σk ≤ 1 kf ：辐射