cyclin+G1在小鼠卵巢颗粒细胞的表达及调控.pdfVIP

四川大学硕七论文 in cyclG1在小鼠卵巢颗粒细胞的表达及调控 (摘要) 生理专业 研究生张惠 指导教师何亚平 细胞周期(cellcycle)与多种人类疾病相关，其中最重要的是与肿 瘤的关系。细胞周期的调控是一系列正负调节因子相互作用的结果，其中 最关键的调控因子包括周期蛋白依赖性激酶(CDKs)及细胞周期蛋白 用的一类特殊蛋白质。迄今为止，在哺乳动物细胞中已经发现至少有16 种细胞周期素，其作用于细胞周期的各个时期，参与调控细胞的增殖分化 过程。 G1是发现较晚的一种细胞周期素，在骨骼肌、卵巢及肾中表 cyclin G1在细胞周 GI作为p53的靶基因，能被野生型p53转录激活，提示cyclin 期中可能作为负调节因子，参与DNA损伤后G2／M期的阻滞，DNA的损伤修复 及细胞调亡等过程。另一方面，cyclinG1在细胞周期中又可作为正调节 in 因子，促进细胞生长增殖。cyclG1在不同的组织具有不同的生物活性， 推测可能与其表达水平有关。 Gl 1996年，MaryC．Home发现cyclinG1在卵巢中高表达。但cyclin 在卵巢中表达的细胞定位，cyclinG1是否参与了颗粒细胞的增殖分化过 四川大学硕七论文 程以及cyclinG1表达水平是否受垂体促性腺激素的调控等未见详细报 道。鉴于颗粒细胞在卵泡发育过程中发生的一系列形态功能变化以及 G1在颗粒细胞 G1在其它组织细胞中的作用，本课题将研究cyclin cyclin 中的表达是否受FSH与hcG／LH的调节，进一步阐明cyclinG1在颗粒细胞增 殖分化过程的作用。性成熟小鼠经腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)。 48h后取其双侧卵巢并分离颗粒细胞，于无血清培养基中进行体外培养， 量RT-PCR、细胞免疫组化、westernblot等方法从mRNA和蛋白质水平检测 G1表达水平的 G1表达以及FSH和hCG对cyclin 小鼠卵巢颗粒细胞中cyclin 影响，以期进一步阐明cyclinGl在颗粒细胞增殖分化调控过程中的作用。 步反应法进行RNA扩增，以广泛存在于细胞中的甘油醛一3一磷酸脱氢酶 G1／GAPDH G1和GAPDH条带的光密度值，并以二者的光密度比值(cyclin G1mRNA的表达水平。颗粒细胞的免疫组织化学染色： 比值)代表cylin 直接于24孔板中进行细胞染色，以PBS代替一抗作为阴性对照，染色步 骤按照SP法免疫组化操作方法进行。westernblot：收集细胞后加入细 胞裂解液，按照常规方法提取细胞总蛋白，经样品处理液处理并煮沸后用 于western GI条带与B 否一致，显影后所得x光片扫描各条带的灰度值，以cyclin -actin条带灰度值的比值表示cyclinG1蛋白的表达水平，从而从蛋白 G1的表达。 质水平检测颗粒细胞cyclin G1mRNA表 结果显示，外源性FSH和hCG作用12h后，hCG组cyclin