siRNA介导Sry基因沉默对小鼠胚胎性别决定基因表达影响.pdfVIP

HEREDITAS (Beijing) 2008 2 , 30(2): 195―202 ISSN 0253-9772 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2008.00195 siRNA Sry 1 1 1 1 2 3 吴宁 , 林秀坤 , 廖冰 , 杜卫华 , 韩凤桐 , 赵金红 1. , 100094; 2. , 150030; 3. , 402460 摘要：为研究Sry 基因的调控网络, 采用 siRNA 表达载体介导的 RNAi 技术, 特异性地抑制睾丸决定因子 Sry 在小鼠胚胎中的表达, 并观察Sry 基因沉默后对在两性性腺分化中起重要作用的 Wt1, Sf1, Dax1 , Gata4, Sox9 及 Amh 基因表达的影响。利用本课题组先前构建的 siRNA 重组表达载体(pSilencer4.1/Sry217 及 pSilencer4.1/Sry565), 通过尾静脉注射法导入妊娠9.5 天(9.5 dpc) 的母鼠体内, 在 11.5 dpc 时取胚胎, 对性别鉴 定为雄性的胚胎以RT-PCR 法和Western-blot 检测Sry 基因的表达抑制效果, 并同时用定量PCR 法检测 Wt1 等 上述性别决定相关基因表达变化情况。结果表明, 注射干扰质粒后48 h Sry 基因的mRNA 和蛋白表达水平均降 低, 其中 siRNA 表达质粒pSilencer 4.1/Sry 565 的抑制效果显著, 可达到80% 的抑制率。Sry 基因沉默后, Wt1 基因表达量显著升高; Sf1, Dax1, Gata4, Sox9 基因表达水平没有明显变化; Amh 基因无表达。试验结果表明, Sry 基因表达抑制会导致 Wt1 基因表达升高; 另外, Sry 基因激活 Sox9 基因的表达可能需要其他的辅助因子协同 作用。 ：Sry ; siRNA; 基因沉默; 尾静脉注射; 性别决定基因 Effect of Sry silencing by siRNA on the expression of sex determining genes in mouse embryos 1 1 1 1 2 WU Ning , LIN Xiu-Kun , LIAO Bing , DU Wei-Hua , HAN Feng-Tong , ZHAO Jin-Hong3 1. Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100094, China; 2. Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; 3. Chongqing Academy of Animal Science, Chongqing 402460, China Abstract: In order to investigate Sry regulation network in the development of male embryo, we inhibited the Sry gene expression by RNAi and then examined expression of other sex-related genes. Six genes (Sox9, Wt1, Sf1, Dax1, Gata4 and Amh), which are suggested to be closely