草莓miR156靶基因SPL9克隆与表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2011,44(12):2515-2522 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.12.013 草莓miR156靶基因SPL9的克隆与表达分析 赵晓初，李 贺，代红艳，刘月学，马 跃，张志宏 （沈阳农业大学园艺学院，沈阳 110866 ） 摘要： 【目的】从草莓中克隆SPL(SQUAMOSA promoter binding protein-like)转录因子基因SPL9，并分析 其在草莓植株不同生长时期的表达水平及与 miR156 的表达关系，探讨 SPL9 在草莓植株生长发育中的作用。【方 法】根据苹果SPL基因家族的保守序列设计简并引物，以草莓叶片为试材，利用RT-PCR克隆草莓SPL9基因片段， 在此基础上利用 RACE 方法克隆 SPL9 的 cDNA 全长。利用实时定量 RT-PCR 技术分析草莓叶片中 SPL9 及 miR156 的 表达水平。【结果】从草莓（Fragaria×ananassa ）品种‘全明星’中克隆出 SPL9 基因的 cDNA 全长序列，命名 为 FaSPL9。其 CDS长度为1 143 bp，编码381 个氨基酸，与拟南芥 AtSPL9、葡萄 VvSPL9、枳 PtSPL9、苹果MdSPL9 以及玉米 ZmSPL9 的氨基酸序列同源性分别为：40.30%、64.57%、56.09%、70.33%，38.35%。FaSPL9 有着高度保 守的 SBP 结构域和一个双向核定位信号 KRXXXRRRK。FaSPL9 基因序列中包含 miR156 的靶位点，实时定量 RT-PCR 结果表明，在草莓植株的不同生长时期 FaSPL9 的表达量不同，且与 miR156 呈现相反的表达模式。【结论】从草 莓中分离出FaSPL9基因，其作为miR156的靶基因，推测 FaSPL9 对草莓植株的生长发育具有重要的调控作用。 关键词：草莓；SPL9；实时定量RT-PCR；miR156 Cloning and Expression Analysis of miR156-Targeted SPL9 Gene from Strawberry ZHAO Xiao-chu, LI He, DAI Hong-yan, LIU Yue-xue, MA Yue, ZHANG Zhi-hong (College of Horticulture, Shenyang Agricultural University，Shenyang 110866) Abstract: 【Objective 】The aim of this study was to clone the full length cDNA of the gene encoding SQUAMOSA promoter binding protein-like 9 (SPL9) from strawberry, to analyze its expression level at different growth stages of strawberry and the expression relationship between SPL9 and miR156, and preliminarily to elucidate the role of SPL9 gene in strawberry plant development. 【Method 】The fragment of SPL9 gene was amplified from strawberry leaves by RT-PCR with the degenerate primers des