人LIGHT基因的克隆及其在HepG-%2c2-细胞中的表达.pdfVIP

中文摘要 人LIGHT基因的克隆及其在HepG：细胞中的表达 【摘要】目的分析外周血单核细胞uGHT基因的表达，克隆uG}IT基因，构建 含有人uGHT基因的载体，转化大肠杆菌，培养并转染人肝癌细胞，检测表达。 方法按常规方法分离正常人的外周血单个核细胞后，提取总RNA，再以RT_PcR 法分析PBMC内uGHT基因的转录表达，并克隆相应的全长人uGHTcDNA。对产 物及载体质粒pcDNA4c分别进行限制性内切酶砌m础／Ec删双酶切，连接载体。 法检测uGHT的表达，绘制标准曲线，sPSSlO．0统计软件进行相关系数的统计意 义检验。结果在用PHA刺激过的外周血单个核细胞中，砌：PcR扩增出了uGHT 全长723bp的cDNA。酶切产物鉴定正确后，uGHrcDNA与载体连接，成功转化 大肠杆菌，并获得超纯重组质粒。经DNA序列测定，仅有一个碱基发生同义突变， 不改变编码氨基酸。培养人肝癌细胞系HcpG2并传代。经转染EGFP后，确定用O．铆g DNA，3．劫lEnhancer，1叽l 的表达，并绘制标准曲线，相关系数r=O．997，统计学分析有高度统计意义。uGHT 蛋白表达量在转染24h最高，5d最低。结论本实验成功克隆uGHT基因，构建了 重组质粒pcDNA4c—uGHT，转染了人肝癌细胞，成功检测uG耵的表达。 硕士研究生马湘(肝胆外科) 指导教师吴力群教授 【关键词】LIGHT；基因克隆；转化；HepG2细胞；转染 2 英文摘要 clonedmolecllleoncells CI蚰ingofhumaⅡuGIrrgene锄d旺p聆ssionoftheHepG2 To uGHT in b100dmononuclearcelIs 【Abstnct】：Objective expression analyze gene peripheral clone constnIcthuman UGHT VecIoL胁sf0珊into 口BMCs)10 geⅡe，t0 uGHT唧ressiⅡg Ec0“， 柚dtransfecIhumaⅡ1ivercancerceⅡs．MemodsPBMCswere isolatedandcultllred conv曲lionally in 10％FcS．TotalRNAwasext眦ccd丘om RPMll640，containing PBMcS．UG哪genee印ression inPBMcs R1：PcR．皿efIlu RT-PCR．1k w粘analyzedby 1eⅡglhumⅡcDNAⅥms砌plifiedby resunandthevector mm珊强d且傩正UGHT pcDlqA4Cwere陀spec6veIydigestedbyenzymes cDNAwascoⅡⅡected埘thtlle chloridemethodwasusedtomake plasmid．calcium compel即ce． 耽enthe wastmsfof呲dinloEc0打JMl09．Cultureh岫anHvercaⅡcerceU rccombjn叫pl船mid lm