O型口蹄疫病毒单克隆抗体研制.pdf

O型口蹄疫病毒单克隆抗体的研制 摘要 单克隆抗体有着特异性强、重复性好的特点，可开发成诊断试剂盒和试纸条及应用于各项 基础研究。本研究旨在研制出。型口蹄疫病毒(nIDv)的单克隆抗体，进而为研制快速、特 异、灵敏和便捷的检测FMDv抗原试剂盒和试纸条打下基础。 通过细胞培养和病毒增殖的方法获得含O型FMDv的培养液，经过病毒灭活，浓缩，离心 等步骤，提纯得到了O型FMDv全病毒抗原。用该抗原对籼／c小鼠进行常规免疫，经四 次免疫后，应用艘婚．1000，将免疫小鼠的脾细胞与sP2／o细胞，进行细胞融合，制备杂交瘤细 胞株，经间接ELIsA筛选和多次克隆化，获得3个能分泌FMDv抗体的单克隆杂交瘤细胞株， 分别命名为细胞株2F1、6H4和2G7。 经单克隆抗体亚类鉴定，细胞株6H4和2G7分泌的抗体为I窖G1亚类，2n分泌的抗体为 lgG2b亚类。特异性检测结果显示，3株单克隆抗体杂交瘤细胞株不与BHx-21正常细胞培养上 清液发生反应，与A型、C型和Asial型肿v抗原不发生型间交叉反应。经闯接EUsA测 定，细胞培养上清液效价2F1为1：800，6H4为l：6400，2G7为1：800；腹水效价2F1为1： 1xl矿，6H4为1：4×103，2G7为l：1×1矿。 单克隆抗体稳定性检测发现，细胞株6114多次传代后腹水效价能保持在1：8×1旷以上，而 2F1和2G7在多次传代后腹水效价也都能保持在l：l×104左右。纯化后矾4单克隆抗体的 kD和25．OkD左右。对细胞株 sDs．BAGE结果显示，Ig抗体重链和轻链，分子量分别在45．O 6H4的染色体计数结果发现。该细胞株有100条染色体。 通过EusA试验对3株单克隆抗体的抗原识别位点进行了分析，结果显示，杂交瘤细胞株 6H4与2F1针对的抗原表位是部分重叠的，而与2G7针对的抗原表位是完全不～致的。 单克隆抗体结合胶体金技术初步应用研究表明，采用柠檬酸三钠还原法制各胶体金颗粒，可 8．64下的稳定点为12 以对6H4单克隆抗体进行标记。6H4单克隆抗体在pH mg几，可制备成金标 记抗体，并制成金标记抗体反应膜，有望参与组装成检测FMDv抗原的测试条。 本研究研制出了O型肿v的单克隆抗体，并为尽快研制出检测FMDv抗原的测试条产品 打下了坚实的基础。 关键词 O型口蹄疫病毒，杂交瘤技术，单克隆抗体，胶体金技术 AbstI-act Themonodonal and characIers，andiIcanbe antibody(McAb)has make sIrongspecificrepeat into ofdetccti叩aIldbeusedresearch pmductions in fields．The ofIbis wereforobtaiⅡ pufposespaper m呻oclonalantibodiest00 Foot-and-MouIbDisease make typc Vi兀ls(nmV)，aⅡdfor lh锄into deteclive ofFMDV witha andcon卵nientmeall． produc60nsa埘gen r印id，sped缸，sensitive ceIlculturcand ccnculture whichhasFmV By Vinls舢ltiplicati伽metbods，tllesupcmatant was ase—