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HGF 对大鼠微小病变肾病模型中ILK 表达的影响 中文摘要 目的：肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF ）是一种多效性多肽生长因子, 它 能刺激多种上皮和内皮细胞进行有丝分裂、运动，在肾小管形态发生、肾脏胚胎的形成、 肾组织的损伤修复和再生中起着非常重要的营养作用。而整合素连接激酶（integrin- linked kinase ，ILK ）是一种新发现的粘附蛋白，与整合素β的胞浆区域相连，是细胞内 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。它在调节细胞周期、基质积聚、肿瘤发生等中起重要作用，也 参与了肾脏疾病的发生发展过程。新近的研究表明ILK在足细胞中表达水平较高，对维 持肾小球基底膜（glomerular basement membrane ，GBM ）的完整性、保持肾小球的滤过 功能和防止蛋白质的漏出有重要意义。本研究主要通过组织病理学观察、免疫组化、免 疫荧光方法，观察在微小病变肾病（Minimal Change Disease ，MCD ）大鼠体内不同时 间点的ILK蛋白水平变化，探讨ILK在足细胞损伤中的意义及其可能机制，同时进一步 探讨了HGF干预时，微小病变肾病模型中ILK 的表达变化。 方 法：1.微小病变肾病（MCD ）动物模型的建立：选取清洁级雄性SD大鼠72只，随机 分为三组：对照组、模型组、肝细胞生长因子干预组，模型组和肝细胞生长因子干预组 的大鼠经尾静脉一次性注射阿霉素注射液（浓度2mg/ml ，7.5mg/kg剂量），复制MCD 模型，肝细胞生长因子干预组从注射阿霉素后的第三周开始给予腹腔注射肝细胞生长因 子（30ug·kg-1·d-1 ），直至试验结束；正常对照组尾静脉一次性注射等体积的生理盐水。 各组大鼠分别于建模后第7、14、21 、28天宰杀，每组各6只，留取肾脏标本，处死前于 大鼠内眦静脉采血约3ml，离心分离血清测血浆白蛋白、尿素氮、肌酐、胆固醇。大鼠 处死前1天代谢笼收集24小时尿液，测24小时尿蛋白定量。2.进行HE染色，光镜、电镜 下观察肾脏病理改变情况。3 ．用免疫荧光技术检测ILK蛋白在肾小球的定位分布，分析 各组间ILK在不同时间点的表达情况，及其与肾小球足细胞损伤程度间的关系。4.采用 电泳法测定血浆白蛋白，采用磺基水杨酸法测24小时尿蛋白定量，分析各组间血浆白蛋 白、24小时尿蛋白的变化，以及与ILK 的关系。 结 果：1. 采用尾静脉一次性注射阿霉素注射液复制MCD模型成功。2.模型组大鼠肾小 球中ILK蛋白的表达7天时减少，但与对照组相比，差异无统计学意义（p0.05 ）；14天 明显增加，21天达到最大值，与对照组相比差异有统计学意义（p0.05 ）。与模型组相 比，HGF干预组大鼠肾小球中ILK蛋白的表达21天减少，28天明显减少，差异有统计学 意义（p0.05 ）；3.与对照组相比，模型组大鼠24h尿蛋白的排泄量7天增加，21天达高 峰，差异有统计学意义（p0.01 ）；与模型组相比，HGF干预组24h尿蛋白的排泄量21 天及28天均明显降低，差异有统计学意义（p0.05 ）；4.与对照组相比，模型组血清白 蛋白7天开始下降，21天降至最低点，差异有统计学意义（p0.01 ）；与模型组相比， HGF干预组血清白蛋白在21天及28天均明显升高，差异有统计学意义（p0.05 ）。5. 肾 组织形态学与病理学改变：肉眼观对照组、干预组肾脏体积大小正常，颜色深红，切面 皮髓质分界清楚。模型组肾脏体积稍大，颜色深红，切面皮髓质分界也清楚。光镜下可 见模型组少数肾小球体积稍增大，炎细胞浸润，肾小球毛细血管可见红细胞渗出，近端 2 HGF 对大鼠微小病变肾病模型中ILK 表达的影响 肾小管可见脂肪变性、脱落，肾小管管腔内蛋白管型形成，随着时间延长，病变程度加 重，21天时最明显。与模型组比，HGF干预组肾小球体积稍减小，肾小球毛细血管红细 胞渗出、炎细胞浸润减少，近端肾小管上皮细胞脂肪变性减轻，肾小管蛋白管型减少。 电镜下：模型组可见部分肾小球基底膜裸露，足细胞的少量脱落，足突大部分融合或消 失；HGF干预组足突融合较模型组有所减轻。6.相关分析结果显示，模型组ILK表达的 变化与24h尿蛋白定量的变化呈正相关(r=0.743, P0.01) 。 结 论：1. ILK表达增加及分布异常，与足