1-磷酸鞘氨醇受体在LPS和TNF-α介导内皮细胞高通透性中作用.pdfVIP

殖、血管生成、免疫以及过敏反应等生物学作用。现已发现与S1P特异性结合 经过多年的研究，普遍认同细胞种类的不同，S1P受体的表达情况也有很大的差 受体的表达及激活状态的动态平衡维持J下常内皮细胞的功能。在内皮细胞的一 个重要功能——内皮屏障功能中，S1P1R的激活能降低内皮细胞通透性，从而 增加内皮屏障功能；S1P2R和S1P3R则相反，其激活能增加内皮细胞通透性， 从而降低内皮屏障功能。在S1P受体生理学功能已研究较透彻的同时，病理情 况下对S1P受体表达及其功能影响的研究尚少。LPS及TNF．a作为致炎物质能 304 破坏内皮细胞间连接，从而导致内皮细胞通透性的增高。本研究选取ECV 和HMVEC细胞，采用RT-PCR和Westernblot方法，在明确ECV304和HMVEC 细胞S1P受体表达特性的基础上，探讨LPS或TNF．仅刺激对这两种细胞S1P受 体表达的影响；并通过双层小室检测内皮细胞单层荧光标记物的漏出率，用通 透系数Pa的大小反应内皮细胞单层的通透性，观察其受体表达和活性的变化对 中文摘要 LPS或TNF．0【所致的内皮细胞高通透性中的作用。 一、S1P受体在ECV304和HMVEC中的特点 ． 已有不少文献报道，内皮细胞表达的S1P受体主要是S1P1R、S1P2R和 S1P3R。本实验证明了ECV mRNA的表达。但在蛋白水平上，ECV304细胞中仅可见S1P2R的蛋白条带， 水平上ECV304和HMVEC的S1P受体表达没有差别，但蛋白表达显示明显的 特点。本结果进一步证明，不同来源的内皮细胞S1P受体的表达各有差异，体 现了内皮细胞的异质性；研究还首次查明了ECV 达的特点。 二、LPS刺激后ECV 其对通透性的影响 1．LPS刺激后ECV304和HMVEC细胞S1P1R和S1P3R表达的改变 (1)LPS刺激后ECV304细胞S1P1R和S1P3R表达的改变 LPS刺激后，ECV 差异(P0．05)，亦未见明显的蛋白表达。 (2)LPS刺激后HMVEC细胞S1P1R和S1P3R表达的改变 (尸0．05)，蛋白表达亦未见明显变化。 2．LPS刺激后ECV304和HMVEC细胞S1P2R表达的改变 (1)LPS刺激后ECV304细胞S1P2R表达的改变 结果表明，LPS刺激可以分别以剂量和时间依赖的关系使ECV304细胞 S1P2R mRNA的表达较正常对照组显著增加(氏0．05)；蛋白表达结果也显示， ¨ 在ECV304细胞中，LPS以剂量和时间依赖的方式使S1P2R蛋白的表达较正常 对照组显著增高(尸O．01)。 结果提示，LPS刺激ECV 304细胞可使其S1P2R的mRNA和蛋白表达水平 均显著增加。 (2)LPS刺激后HMVEC细胞S1P2R表达的改变 结果表明，LPS刺激可以分别以剂量和时间依赖的关系使HMVEC细胞 S1P2R mRNA的表达较正常对照组显著增加(P0．05)；蛋白表达结果也显示， 在HMVEC细胞中，LPS以剂量和时间依赖的方式使S1P2R蛋白的表达较正常 对照组显著增高(P0．05)。 均显著增加。 3．抑制S1P2R的活性对LPS介导的ECV304和HMVEC内皮细胞高通透性的影 响 (1)抑制S1P2R的活性对LPS介导的ECV304内皮细胞高通透性的影响 在ECV304细胞中，0．2nmol／ml 导的内皮细胞高通透性。 0．2 在HMVEC中，JTE一013nmol／ml使Pa值从单纯LPS刺激的206％下降 内皮细胞高通透性。 三、TNF．a刺激后ECV304和ItMVEC细胞SIP受体表达的改变及其对通透 性的影响 1．TNF．仅刺激后ECV304和HMVEC细胞中S1P1R表达的改变 (1)TNF．a刺激后ECV304细胞中SIPIR表达的改变 结果表明，TNF．Or,刺激可以分别以剂量和时间依赖的关系使ECV304细胞 111 中文摘要 S1PIR