β淀粉样蛋白1-42对原代培养大鼠小胶质细胞中TNFa表达影响初步与研究.pdf

B淀粉样蛋白卜42对原代培养大鼠小胶质细胞中TNF0【 表达影响的初步研究 摘要 【目的】 通过原代培养的方法培养大鼠小胶质细胞，掌握其培养、分离及鉴定的方法， 从而为进一步研究其功能奠定基础。初步阐明Apl．42对体外小胶质细胞中 炎治疗提供一定的理论依据。 【方法】 取S．D新生大鼠的大脑皮层进行混合胶质细胞的原代培养，用摇床振摇法 分离小胶质细胞，并进行Mac．1免疫细胞化学鉴定。取分离纯化后培养10天左 右的细胞，以l×105／孔的浓度接种至六孔板中，稳定24小时后，用含1％的血清 为0．3umol／L、3umol／L的培养基分别刺激细胞6小时、24小时、48小时。用 荧光定量PCR的方法检测各组细胞中TNFamRNA表达量，并收集细胞培养液 进行ELISA检测，并进行统计学分析。 【结果】 1．原代培养过程动态观察：取材后l～2d，由于大量神经元死亡，细胞较稀 疏：随后星形胶质细胞开始增殖，至5～6d，长满培养瓶，而同时小胶质细胞也 明显增多，呈亮点状分布于星形胶质细胞的上层；9～12d，小胶质细胞的数量达 到高峰。振摇分离2～3天后，细胞呈圆点状；分离后约8～10d后小胶质细胞胞 体伸展，呈多形性，周围有光晕。 2．小胶质细胞Mac．1染色：免疫细胞化学染色显示Mac．1阳性细胞为棕黄 色，呈多形性，对照组不着色。经计数，结果表明细胞的纯度为92％，达到实验 要求。 3．TNF0【mI矾A的表达情况： 升高， 24小时明显升高(尸O．01)，48小时开始下降。同组内比较，6小时与24 小时比较，差异有统计学意义(PO．01)。 达到高峰，明显高于同时间点其它组(尸O．01)；在48小时，表达量丌始下降， 仍高于同时间点其它组(尸O．01)。同组内比较，24小时、48小时分别与6小时 相比，差异有统计学意义伊0．01) 4．细胞培养液上清中TNFa浓度的变化 0．05)。 高并达到高峰，明显高于同时间点其它两组，差异有统计学意义(尸0．01)；在 48小时，浓度开始下降，分别与该时间点其它两组比较，差异有统计学意义(尸 O．01)。同组内比较，任两时间点之间比较，差异均有统计学意义(尸0．01)。 【结论】 1．采用“营养缺失法，并结合“摇床分离法”能够获得高纯度的小胶质细胞。 mRNA的表达及促进 2．p．淀粉样蛋白1．42能够上调原代小胶质细胞中TNFa TNF仪蛋白的分泌。 【关键词】 D．淀粉样蛋白1．42，肿瘤坏死因子．a，小胶质细胞 2 of beta 1-42on in EfIfect peptide TNFO【expression amyIoid rat cencultures microgIial primary Absract 【objectiVe】 thecen the of andindentification￡Ibout 7romasterskillculture，isolation by cultureofrat faVorablefoundationfor如therabout primaU microglia．And，lay study it’s thee行．ectof beta 1·42onthe of mnct