茶树咖啡碱合成酶基因cDNA在烟草中的表达.pdfVIP

维普资讯 第 35卷 第 11期 西北农林科技大学学报 (自然科学版) Vo1．35 No．11 2007年 11月 JournalofNorthwestA ＆ FUniversity(Nat．Sci．Ed．) NOV．2007 茶树咖啡碱合成酶基因cDNA在烟草中的表达 余有本 ，江 昌俊 ，宛晓春 ，黎星辉 (1西北农林科技大学 茶叶研究所 ，陕西 杨凌 712100；2安徽农业大学 农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室 ， 安徽 合肥 230036；3南京农业大学 茶叶科学研究所 ，江苏 南京 210095) [摘 要] 为了在烟草中合成咖啡碱，将咖啡碱合成酶(Teacaffeinesynthase，TCS)基因cDNA全序列克隆到双 元载体pBI121中，通过农杆菌叶盘抟化法将TCS基因成功转入烟草，结果得到72株转基因烟草植株。对其中3株 转基 因植株进行 PCR检测和 PCR-Southern检测 ，证实 TCS基因已整合到基 因组 中；RT-PCR和Northern分析显示 ， TCS在这些植株中均能正常转录。用从转基 因植株 中提取的粗酶液进行体外酶促反应 ，能催化 7一甲基黄嘌呤和可可 碱 向咖啡碱 的转变 ，由此表 明，转基 因烟草植株 中能产生具有正常生物学活性的TCS，但从 3株转基 因烟草中均未检 测到咖啡碱 。 [关键词] 咖啡碱；咖啡碱合成酶；转基因烟草 [中图分类号] $571．1；Q786 [文献标识码] A [文章编号] 1671—9387(2007)11—0181—06 Expressionofteacaffeine synthasecDNA intobacco YUYou—ben ，JIANGChang-jun，WAN Xiao—chun ，LIXing—hui。 (1TeaResearchInstitute，NorthwestA FUniversity，Yangling，Shaanxi712100，China：2KeyLaboratoryofTea ChemistryandBiotechnologyofMinistry0，Agriculture，AnhuiAgriculturalUniversity，Hefei，Anhui230036，China； 3TeaScienceResearchInstitute，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing，Jiangsu210095，China) Abstract：Inordertosyntheszecaffeine，thefulIlengthoftheteacaffeinesynthase(TCS)eDNA was clonedintothebinaryvectorpBI121．TCSeDNA wasintroduced intotobaccobyemployingtheleafdisk methodofAgrobacterium mediatedtransformation，and72transgenictobaccoplantswereobtained，among which，threetobacceplantsweretestedbyPCR andPCR—Southernblot，andtheresultconfirmedthatthe TCScDNA hadbeen integrated intotobacco genome．RT_PCR andNorthernblotindicatedthattheTCS genecouldbetranscribednormally．Theresultsofinvitro enzymaticreactionindicated thatthecrudeen～ zymeextractedfrom