短蛸外套膜和足甲硫氨酸脑啡肽的免疫组织化学定位.pdfVIP

维普资讯 第26卷第 1I期 水 产 科 学 V0】．26No．儿 2o07年 l1月 nSHERIES SCIENCE Nov．2007 短蛸外套膜和足甲硫氨酸脑啡肽的免疫组织化学定位 沙爱龙 一，孙虎山2，王宜艳2 (1．山东师范大学 生命科学学院，山东 济南 250014；2．鲁东大学 生命科学学院，山 东 烟台 264025) 摘 要：采用免疫组织化学 SABC法对短蛸外套膜和足中甲硫氨酸脑啡肽 (met—Enk)进行定位研究。 试验结果表明，短蛸外套膜、腕、腕间膜、漏斗中均有met—Enk存在，外套膜背面、腕和腕间膜上皮组织 及其附近的部分细胞和神经纤维呈met—Enk强阳性或阳性；外套膜腹面和漏斗上皮组织及其附近的 部分细胞和神经纤维呈met—Enk阳性或弱阳性。met—Enk在短蛸外套膜和足不同部位分布密度的 不同，可能与各部位的功能不同有关。 关键词：短蛸；外套膜；足；甲硫氨酸脑啡肽；免疫组织化学 中图分类号：Q26 文献标识码：A 文章编号2007)11-0622-03 短蛸 (Octopusocellatus)属软体动物门、头足 将禁食24h的短蛸放置于解剖盘中，分别剪下 纲、八腕 目、章鱼科、蛸属，主要栖居于温带偏北海 其外套膜背面、外套膜腹面、腕、腕间膜、漏斗等组 域，是我国北方沿岸蛸类中重要的经济种之一。肉 织块，放人0．1mol／L、pH7．4磷酸盐缓冲液(PBS) 嫩、味美，具有很高的经济价值…。目前已见短蛸 配制的4％多聚甲醛中，室温固定5—7h后用0．05 发育、遗传、营养成分分析、黏液细胞分布等研究报 mol／L、pH7．4磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗2次，每次 道L2引，但其脑啡肽 (Enkephalin，Enk)免疫组织化 30min。将冲洗后的组织块滴加包埋剂后迅速冻 学定位的研究，尚未见报道。Leung等 最初从贻 结，用Leica恒冷箱冰冻切片机进行冰冻切片，厚度 贝(Mytilusedulis)的足神经节分离出met—Enk和 20 。切片干燥后4℃保存。 leu—Enk，其分子组成和结构与哺乳动物体内的脑 取出切片，空气干燥后，加入0．3％的过氧化 啡肽相同。Andersen等 采用免疫荧光标记法，在 氢一 甲醇液处理 30min，抑制内源性过氧化物酶 贻贝消化道上皮细胞、肝胰腺和神经节中检测到met 活性 。PBST(含0．05mol／LpH7．4的PBS、0．9％ — Enk。散大蜗牛(Helx／a~persa)足和触须的领细胞 的NaCI、0．3％的TritonX一100)漂洗 3次，每次5 中也有met—Enk分子存在，并且幼体的含量高于成 min。用兔抗鼠met—Enk(1：400)室温孵育 3—4 体 j。笔者采用免疫组织化学方法对短蛸外套膜和 h。PBST漂洗 3次，每次5min。生物素标记羊抗 足met—Enk进行定位研究，以期为met—Enk调节 兔IgG(1：200)室温孵育50min。PBST漂洗 3次， 头足类各种生理功能机制的研究积累资料。 每次5min。链霉菌抗生物素蛋 白与过氧化物酶复 合物室温孵育30min。PBST漂洗3次，每次5min。 1 材料与方法 3’，3’一二氨基联苯胺法(DAB)显色 10min。以抗 1．1 材料 体稀释液代替一抗作为空白对照。苏木素复染核， 健康新鲜活短蛸，2006年 10月购 自烟台环海