鼻息肉组织和慢性鼻窦炎粘膜蛋白质二维电泳和质谱分析--初步报道.pdfVIP

鼻息肉组织和慢性鼻窦炎粘膜蛋白质的二维电泳和 质谱分析——初步报道1 1 1 1 2 王天生 ，孙虹 ，贺广湘 ，肖志强 1.中南大学湘雅三医院耳鼻咽喉头颈外科学教研室，湖南长沙（410013 ） 2. 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室，湖南长沙（410013 ） E-mail ：shjhaj@ 摘 要：目的：用二维电泳和质谱分析等方法寻找鼻息肉和慢性鼻窦炎之间差异表达的蛋白 质，希望能发现与息肉形成相关的蛋白成分，为用蛋白质组学方法寻找用于鼻息肉诊断、分 型的生物标志物（biomarker ）以及对鼻息肉发病机理的相关研究打下基础。方法：建立分 辨率高、重复性较好的鼻息肉和慢性鼻窦炎组织蛋白质的二维电泳图谱，用PDQUEST7.0.1 分析差异表达的蛋白质点。经基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱分析（matrix-assisted laser desorption /ioniztion time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS ），将获得的肽质量 指纹图（peptide mass fingerprinting, PMF ）质量数输入到互联网上的专用数据库,查询并鉴定 蛋白质。结果与讨论：发现多种细胞因子和转录因子在鼻息肉和慢性鼻窦炎之间有差异表达， 如细胞间黏附分子（ICAM-1 ）和卵泡抑素（follistatin, FS ）。FS 在鼻息肉中的特异表达，可 能参与鼻息肉的血管形成或阻断激活素A （activin A ）的作用，后者是一种可导致基质沉积 的炎性介质。本实验发现的差异表达的细胞因子和转录因子在鼻息肉形成和发展中的作用尚 不清楚，需进一步研究。用高通量的蛋白质组学技术可同时鉴定鼻息肉和慢性鼻窦炎组织中 差异表达的蛋白质，将有力促进对鼻息肉生物标志物和发病机理的研究。 关键词：鼻息肉，蛋白质组学，细胞因子，生物标志物，质谱分析 1. 引言 鼻息肉是众所周知的常见病和多发病，以鼻粘膜高度水肿和术后易复发为其主要临床特 征。大量基础研究表明，多数鼻息肉的主要病理特点是以嗜酸粒细胞为主的炎症细胞浸润和 粘膜水肿，多种免疫细胞和大量细胞因子参与了鼻息肉的发生和发展，形成一种复杂的细胞、 分子网络机制。在临床研究中我们注意到，鼻息肉和慢性鼻窦炎同时出现的机会比较多，在 鼻息肉中发现的一些免疫细胞和细胞因子的上调，同样可出现在慢性鼻窦炎患者的鼻粘膜组 织内；另一方面，临床发现即使是严重的、长期的慢性鼻窦炎，未必都有息肉形成；而有些 鼻息肉患者，其鼻窦炎并不严重。以上现象提示，同为鼻粘膜慢性炎症性疾病的鼻息肉和慢 性鼻窦炎，其发病机理即有紧密联系，又有各自的特殊性；对二者进行联合研究，可能得到 一些有意义的线索。为此，我们用蛋白质组技术[1, 2]鉴定了NP和CNS组织中部分有差异表达 的蛋白质，并对其可能的作用进行了初步分析。 2. 材料与方法 2.1 研究对象 从 2003 年以来在我科接受手术治疗的符合全组慢性鼻窦炎或鼻息肉伴慢性全组鼻窦炎 的患者中随机各选择7 例作为研究对象。参照 1997 年海口标准[3]分为鼻息肉组（NP组，Ⅱ 型 3 期，男 3 例，女 4 例，年龄 18～68 岁，平均 43.0 岁）和慢性鼻窦炎组（CNS组，Ⅰ型 3 期，男 3 例，女 2 例，年龄 17～40 岁，平均 28.4 岁）。术前均停用类固醇激素 4 周以上， 1本课题得到教育部“高等学校博士学科点专项科研基金（20030533006 ）”、湖南省自然科学基金（01JJY2092 ） 和湖南省卫生厅科研基金（2001 －T48 ）的资助。 -1- 其它治疗为鼻内镜手术常规的围术期处理。 2.2 样本的采集及预处理 标本取自鼻息肉组的钩突息肉和慢性鼻窦炎组的钩突粘膜。组织切下后迅速用生理盐水 洗净其表面的血液和粘液，并剔除紧密粘附的软骨和骨质，将其剪成 3～5mm