毕业论文答辩--远志与PICKI蛋白PDZ结构域结合能力荧光光谱分析.pptVIP

1、研究背景 中草药具有疗效好、副作用小、适合长期服用及安全可靠等许多优点，中草药由于具有作用机制的多靶点和低毒性的特点，在神经保护和防治等方面有着丰富的经验。因此国内外在神经性疾病的研制与开发方面越来越注重传统中药，人们越来越重视从天然植物中提取抗神经性疾病有效成分药物，并探讨其构效关系。 2、研究目的及意义 目前，神经性疾病比如中风，癫痫，精神分裂症，抑郁症等疾病因为其发病机制复杂，诱发原因较多等因素，已成为常见病、高发病，其发病率正在快速攀升。传统的药物具有效果不明显等缺陷，对神经性疾病的药物治疗，迄今为止尚未研制出理想西药。 2.2、研究意义 PICK1的PDZ结构域，作为蛋白-蛋白相互作用元件，介导其与多种蛋白质发生相互作用，与多种神经性疾病的发生密切相关。　　　 因此，PICK1成为一个理想的药靶蛋白，小分子物质可以通过与PICK1的PDZ结构域的特异性结合，干扰或阻断PICK1与配体蛋白的天然相互作用，从而起到治疗相关疾病的目的。但是从远志中筛选PICK1蛋白中PDZ结构域的结合成分，未见相关报道。 4、实验结果与分析 4.5、综合分析结果 5、发展展望 有文献报道，PICK1 PDZ 结构域上的K83 位点对于PICK1 与配体的相互作用最为重要，因此改变该位点的氨基酸很可能会改变PICK1 PDZ 结构域与配体的结合能力，使得PICK1 与其他分子的结合能力发生不同程度的改变。该结果对于进一步实验的开展具有重要的指导意义。进一步的工作将围绕远志与PICK1不同突变体之间的结合能力进行，以期为新一类神经性药物的开发提供支持和验证。 姓名： 指导教师： 班级：工艺1121 学号： 远志与PICKI蛋白PDZ结构域结合能力的荧光光谱分析 目录 1 2 3 4 5 研究背景 研究目的及意义 实验内容 实验结果与分析 发展展望 2.1、研究目的 本论文围绕PICK1的PDZ结构域以及远志开展工作 首先将PICK1转入大肠杆菌中，在大肠杆菌中获得蛋白表达，破碎，目的蛋白经硫酸铵沉淀纯化得到了PICK1蛋白。 其次利用荧光光谱法分析远志粗提物与PICK1的PDZ结构域的结合情况，探讨远志粗提物与PICK1的PDZ结构域的相互作用情况。 3.1、实验目的 3、实验内容 实验仪器：电子天平，蒸发皿，加热套，回流管，圆底烧瓶，旋转蒸发仪，容量瓶，烧杯，恒温水浴锅，荧光光谱仪，烘箱，灭菌锅，荧光皿等。 实验所需试剂：远志 ，无水乙醇，95%乙醇，石油醚，乙酸乙酯 ，正丁醇，二甲基亚砜（DMSO ），PBS缓冲液，PICK1蛋白的PDZ结构域等。 3.2、实验仪器与试剂 实验步骤：称取远志100g，按照10倍量、8倍量、8倍量70%乙醇，分别加热回流提取3次，每次2h。将3次提取液混合，过滤，37℃旋蒸至无醇味，取1/6置蒸发皿中，60℃水浴烘干，得到70%醇部分，标记为A。剩余5/6的提取液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等体积进行萃取3次，萃取液混合旋蒸，烘干后分别得到石油醚提取物B、乙酸乙酯提取物C、正丁醇提取物D。水提部分用滤纸过滤后加无水乙醇至终浓度达到90%，11000r离心20min，上清旋蒸，烘干为醇溶部分E，沉淀用水悬起，烘干为醇沉部分F。A、B、C、D、E用DMSO溶解，F用DMSO或水溶解。 3.3、远志提取 3.4、远志提取结果 　　　远志粗提物 　　　 提取量 　　　乙醇提取物 A 　 6.995ɡ 　　　石油醚提取物 B 8.554ɡ 　　　 乙酸乙酯 C 　　　 7.336ɡ 　　　 正丁醇 D 　　　 9.784ɡ 　　　 水提取物 E 　　　 8.234ɡ 　　　 醇沉提取物 F 7.278ɡ 　 荧光皿中溶液体系（PBS缓冲液和蛋白质）是2ml。蛋白质在荧光皿中的终浓度为1μM；其余体积用缓冲液补足。反应时间间隔为2分钟。 　 PICK1及其结构域蛋白与中药提取物结合实验的荧光光谱分析在荧光光谱仪上进行，测定温度为室温，1cm荧光池。PICK1蛋白的激发波长为280 nm，扫描范围为300-500nm。FITC标记的蛋白激发波长为495nm，扫描范围为500-700nm，激发和发射狭缝均为10nm。 将中药提取物储液加入蛋白中，使其终浓度为0.01 mg·mL-1，0.02 mg·mL-1，0.05 mg·mL-1，0.1 mg·mL-1，0.2 mg·mL-1，0.5 mg·mL-1