双子表面活性剂及其保护纳米金作为 缓冲添加剂用于毛细管电泳蛋白质分离.pdfVIP

中国科学 B 辑 :化学 2009 年 第 39 卷 第 10 期 : 1251 ~ 1261 SCIENCE IN CHINA PRESS 双子表面活性剂及其保护的纳米金作为 缓冲添加剂用于毛细管电泳蛋白质分离 刘倩, 李燕清, 杨艳敏, 姚守拙* 湖南大学化学化工学院, 化学生物传感与计量学国家重点实验室, 长沙 410082 * 通讯作者, E-mail: mailto:szyao@ 收稿日期: 2009-05-18; 接受日期: 2009-06-01 摘要 报道了使用阳离子双子表面活性剂作为毛细管电泳的缓冲添加剂用于同时分离酸性 关键词 和碱性蛋白质. 在酸性的缓冲条件下, 只需要使用低浓度的阳离子双子表面活性剂(0.1 双子表面活性剂 mmol/L 18-s-18)作为缓冲液的添加剂, 就可以有效地抑制酸性和碱性蛋白质在毛细管壁的 蛋白质分离 吸附, 从而得到高效的蛋白质分离. 实验表明, 较小的胶束尺寸(如 s = 5~8) 比大的胶束尺 毛细管电泳 金纳米粒子 寸(如 s 4或 10)能更有效地抑制酸性蛋白质的吸附. 改变双子表面活性剂的中间基的长 度能够对蛋白质的电泳淌度进行一定的调节, 从而对分离的选择性进行一定的优化. 在最 优的实验条件下, 蛋白质迁移时间的日内和日间标准偏差(RSD)分别小于0.8%和 2.2%, 回 收率为79%到100.4%. 另外,还考察了双子表面活性剂保护的金纳米颗粒用作毛细管电泳缓 冲添加剂在蛋白质分离中的应用. 实验表明, 在缓冲液中加入纳米金能够缩短分析时间, 并能小幅度地提高分离效率. 最后,使用该方法分析了一系列复杂生物样品, 包括血浆、红 细胞和鸡蛋清样品, 均得到了满意的结果. 1 引言 最常用的抑制蛋白质管壁吸附的方法是使用毛 毛细管电泳(CE)具有高分辨率、高分离效率、自 细管涂层. 聚合物是一种比较好的涂层材料. 中性聚 动化程度高等显著优点, 因此在人类基因组学的研 合物如聚氧乙烯(PEO)[5] 、聚乙烯醇(PVA)[6] 、聚丙烯 [7] [8] 究中发挥了重大作用. 在如今所谓的“后基因组时代”, 酰胺(PAA) 和纤维素 等, 都已经成功地用于制备 CE 也被认为是一种非常有潜力的蛋白质组学研究的 毛细管涂层并用于高效蛋白质分离. 但是, 聚合物涂 工具. 但是到目前为止, CE在蛋白质组学还没有得到 层毛细管的寿命还不是很理想. 虽然交联能够大大 广泛应用, 其中一点非常重要的原因就是蛋白质非 提高涂层的稳定性, 但是操作又相对比较复杂[7]. 阳 常容易在毛细管壁吸附, 导致分离效果很差[1]. 为了 离子聚合物如聚乙烯亚胺(PEI)[9], PDDA[10], 聚凝胺 解决这个问题, 研究者们提出了很多方法. 早期的方 (polybrene)[11], 壳聚糖[12]等也有报道用于蛋白质分离. [2] [3] 其中PDDA 有报道在高浓度时可用于同时分离阳离 法有使用极端的pH 或使用高浓度的缓冲盐 , 但是 [4] [13] 这样容易导致蛋白质变性. 最近Le 等人 也提出了 子和阴离子蛋白质 .