航天紫花苜蓿中黄酮提取工艺及抑菌活性研究.pdfVIP

第五届中国苜蓿发展大会 航天紫花苜蓿中黄酮提取工艺及抑菌活性研究 赵强，陈虹，赵海福 (甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070) 摘要 用索氏回流进行正交提取航天紫花苜蓿中的黄酮(芦丁)，以50rim最大吸光度进行可 见光谱检测，测定芦丁含量，并对两种供试茵进行体外抑茵活性测定。结果表明，通过单因素实验确 定的各因素影响能力大小为：超声提取时间料液比乙醇浓度，含量最高为10．04％；对大肠埃希氏杆 茵和金黄色葡萄球菌的MIC为0．40 mg／mL。 mg／mL和0．70 关键字航天苜蓿黄酮抑茵 sativa 紫花苜蓿(Medicago 生的草本植物。其主根较长、多分枝，茎常直立，几乎无毛，株高一般30～lOOcm。它的名称是由瑞 古等地[21。有许多营业价值，其粗蛋白含量通常在22％左右，含有20种以上的氨基酸∞】。苜蓿黄酮 类化合物是相当丰富的，据报道，苜蓿属植物所含的黄酮类化合物有80多种【6]。苜蓿中的黄酮类化合 物结构多样，种类繁多‘7-8】。黄酮类化合物可以清除自由基，有效的抑制肾上腺素的氧化、降低LDL 浓度和过氧化物的浓度‘9。10】；还可以降低心肌梗塞阻死和动脉粥样硬化的发病率及死亡率111-13】。 作为牧草之王的苜蓿，在高新科技中将大有作为，航天育种也开始越来越被受到关注。航天育种 比常规育种变异频率高、幅度大、有益变异增多、稳定性强，具有明显的优势‘14】。航天育种紫花苜蓿 各方面因素均高于普通紫花苜蓿，其含有多种黄酮类化合物(芦丁Rutin)，有很高的药用价值，具有 健脾胃、滋补强壮、调经活血的作用，可治疗身体瘦弱，气血两亏，脾胃不和，消化不良，月经不调， 腰腹疼痛。本实验针对航天紫花苜蓿中芦丁，先通过正交实验设计，从而优选提取工艺，最终得出最 佳提取方梨15J7】；在提取过程中，采用超声辅助法，因为超声辅助法与单纯的提取法相比，具有效率 高、产品易于纯化和产品的活性高的优点[18-19]。用最佳提取工艺下提取的苜蓿芦丁做体外抑菌活性研 究口o。221，为航空天然绿色药材的开发提供一定的实验依据。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1药材 航天紫花苜蓿(采白天水国家级高新农业园区，经甘肃农业大学草业学院王文博士鉴定)。风干、 粉碎、过筛、备用。 1．1．2仪器 254@中舅謇牧生协会簟生分会 品种与田间管理 管架自动平衡离心机(湘仪离心机仪器有限公司)、TGl6一W型微量高速离心机(湘仪离心机仪器有限 公司)、SHB．IV型双A循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)、电热恒温水浴锅、抑菌操 作台等。 1．1．3试剂 试剂均为国产或进口分析纯。 1．1．4培养基和菌种 牛肉膏蛋白胨培养基，按规定方法配制，分装灭菌备用。大肠埃希氏杆菌、金黄色葡萄球菌为甘 肃农业大学动物医学院保存标准菌株。 1．2方法 1．2．1芦丁标准工作曲线的绘制 准确称取0．100 mL容量瓶中，定容、摇匀，稀释3倍，得到质量 49芦丁标准品，溶解后移入50 mL置于50 mL， mL容量瓶中，加入5％的NaN02溶液5．0 6min后加入4％NaOH溶液20．0mL，15min后定容、摇匀，得到相应浓度的梯度溶液，‘以双重蒸馏水 为参比，在510nm处测定其吸光度值，绘制浓度．吸光值标准曲线。 1．2．2航天紫花苜蓿中芦丁提取及测定 选取乙醇浓度、料液比、超声提取时间三个因素，以L9(33)正交表，进行实验设计。准确称取航 天紫花苜蓿粉末10．09，转移至500mL的烧杯中，并加入相应浓度和体积的乙醇，在室温下浸泡5h， 封口静置。在300W的功率下，超声处理不同的时间，超声结束后，减压抽滤得提取液，，将提取液转 入旋转蒸发仪，减压浓缩至无醇味，转入锥形瓶，加入0．029活性炭脱色，静置过夜，抽滤，将滤液 按编号装入50mL容量瓶，并定容，静置待测定