人肽基脯氨酰顺反异构酶cyclophilin的纯化及蛋白质交联的初步研究.pdfVIP

人肽基脯氨酰顺反异构酶cyclophilin 的纯化及蛋白质交联的初步研究 摘 要 蛋白质分子问的交联是普遍存在的现象。它是多种生理和病理过程的共同特 征。然而，由蛋白质的单体或功能形式转变为交联的二聚体或多聚体的分子机理还 不太清楚。溶菌酶、核糖核酸酶A和蛋白质二硫键异构酶的体外实验显示，蛋白质 交联可经三步完成：1)蛋白质构象包括二级结构改变；2)形成分子间二硫键；3) 形成分子间异肽键。为了进一步探索蛋白质交联途径的三步假说的可行性，以及交 了深入地研究。用RT-PCR方法从中国人胚肝中克隆了hPPIcDNA基 cyclophilin 固定化金属亲和层析技术纯化出了hPPI cyclophilin蛋白。将hPPI cyclophilin和 lysozyme蛋白进行热变性交联实验，结果显示：在热变性的临界温度时，同源和异 源的肽链间都有交联的二聚体和多聚体形成：而低温条件下，却没有交联出现；在 热变性样品中加入二硫键还原剂且．巯基乙醇后，也检测不到任何交联。很明显，只 有当蛋白质的二级结构改变到一定程度，才会发生交联；而且二硫键交联的形成对 异肽键交联的形成起促进作用。这些都为蛋白质交联途径的三步假说提供了一些证 据。 ：黧。轴竺翟凳异篡冬d呐ili吐鼬鼢翻娥塌脓湄白 质折叠，热变性或热的去折勘构象病 ＼ ／＼ ) 2 onthe and of Elementarystudy purificationprotein cross-linking human cyclophilin Abstract Proteininterchain isacommon hasbeen in cross·linking phenomenon．Itimplicated several and themolecular mechanismsfor physiologicalpathologicalprocesses．However forms intocross-linked monomerie／functional forms converting ofproteins dimer／oligomer arenotwell with Aand disulfide understood．Experiments lysozyme，ribonueleaseprotein be isomerase加vitroshow Can