EROD、GST测试法在评价污染物生态效应研究.pdfVIP

EROD、GST测试法在评价污染物生态效应的研究 朱智 陈志永 （河海大学环境科学与工程学院，江苏 南京 210098） E-mail:zhuzhi2301239@126.com 摘要：本文研究了EROD以及GST测试法的实验过程,分析了注射15天后鱼体内肝脏微粒体的 EROD和GST活性与水体中芴污染物剂量良好的正相关性，指出了EROD和GST活性在机体或环境 污染物风险评价中起着关键性的指示作用。同时指出EROD与GST的联合使用能更好的作为早 期的预警系统来监测环境污染状况。 关键词：EROD;GST;生物标志物;污染物毒性评价;早期预警 中图分类号：X830.2 随着工业的发展，化学物质对环境的污染越来越严重，同时污染对生物造成的伤害也越 来越大。因此,在将这些化合物排放到环境中之前, 必须进行必要的风险评估[1] 。尽管许多 污染物含量很低, 但它们之间相互混合,体系复杂,要检测和评估其对环境质量的影响及污 染物在的生态效应,就必须结合化学监测方法、实验室内进行的毒性活体鉴定法以及污染物 作用下生物体内各种指标的变化来进行[2] [3] 。在此情况下,生物标志物(biomarker)在环境研 究中的应用逐渐受到重视。 细胞色素P450与GST分别是是与I相和II相解毒代谢相关.鱼类的I相代谢酶,尤其是细胞 色素P450氧化酶系如7-乙氧基异吩噁唑-O-脱乙氧基酶( EROD),由于与污染物水平有较好的 时间-效应关系而被认为是良好的生物标志物. GST作为II相解毒代谢酶也被认为是适合作 为生物标志物. 因此当前以污染物对肝细胞色素EROD和GST活性的诱导作为评价污染状况最 [4] 灵敏的生物学指标，已经广泛应用于毒理学之中 。 体内和体外方法是目前进行毒性测试的主要方法。体内方法能更好的模拟化合物对生物 毒性的影响，但是过程复杂，耗时较长，费用较高；体外方法快速、简单、成本较低，易于 推广。所以，建立一种体外直接染毒的方法，可以作为化合物毒性和内分泌干扰物的快速筛 选方法。 1 材料与方法 1.1 受试生物种及暴污 所选择的受试生物为鲫鱼，体长15cm左右，体重50g左右。在试验室驯养一周后进行 试验，鱼自然死亡率小于2%。实验室温度为20摄氏度左右。按照0.1、1、2、5、10mg芴/kg 鱼的剂量分别对鱼进行注射，对照注射玉米油，所有鱼注射200ul的试剂，暴露15天。 1.2 酶液的制备 采用Burke和Mayer的方法[5]. 所需全部溶液（KCL和Na HPO 缓冲液）预冷至0℃. 用颈脱 2 4 1 臼的方法杀死动物,将胆囊从肝中除去,用0.15 mol/L KCl 溶液洗去肝中血液,用滤纸吸干, 称重.将肝放入0.25mol/L蔗糖-50mmol/L(pH 7.4,4 mL/g(湿重))Na HPO 缓冲溶液中,用组织 2 4 研磨器匀浆,在4℃,13500g离心20min ,得到微粒体上清液,在液氮迅速冷冻，30s后取出在－ 80℃下保存到冰箱中保存待用. 1.3 EROD活性的测定[6] 将140ul 100mmol/L Tris缓冲液（pH为8.0）、40ul 2.5 mmol/L NADPH，10ul 40umol/L 7-乙氧基异吩唑酮和10ul粗酶液加入96孔酶标板中，对照以水取代NADPH，25℃保温30分钟， 用酶标仪在572nm下测吸光值，每条鱼EROD活性重复测7次，经过统计计算处理每组的平均酶 -1 -1 -1 活性。反应产物异吩唑酮