CE-MS联用技术新发展及其在中药中应用.docVIP

CE-MS联用技术的新发展及其在中药中的应用 摘 要 毛细管电泳-质谱(CE-MS)做为20世纪90年代发展起来的最新联用技术，综合了CE的高效分离能力、广泛的样品适应性和MS的高灵敏度、可提供结构信息等优势,已发展成为一种重要的分离分析手段。本文对近几年来CE-MS 联用技术的发展作一简单的介绍，并对CE-MS在中药领域的一些应用进展予以综述。 关键词 毛细管电泳-质谱联用；中药分析；联用技术；应用 毛细管电泳(CE)具有分离效率高、分析速度快、样品适应面宽、试剂和样品消耗量少、分离模式多等特点[1] , 然而由于CE的进样量少, 采用紫外(UV)检测器时又因为光程短而导致检测灵敏度比较低。当利用激光诱导荧光(LIF)检测器检测时,灵敏度得到极大提高,一般可达10-9~10-12mol.L，但是只适用于有荧光性质的物质,对其他物质进行分析往往需要比较复杂的衍生化处理。质谱(MS)法灵检测不仅有较高的灵敏度, 同时具有较强的定性能力,能够提供样品的结构信息，是CE的一种理想检测器。因此,自1987年Smith等首次提出CE-MS 联用方法以来, CE-MS作为强-强联合的仪器，具有高分离效率和高灵敏度的方法,其应用受到了广泛关注, 并在过去的20年得到了迅速发展。本文主要对CE-MS近年在CE-MS接口技术、CE分离模式和CE-MS联用的质谱类型的发展及其在中药方面的运用进行综述。 CE -MS接口技术的研究进展 CE-MS联用法是20世纪90年代末期才发展起来的最新联用技术，是利用毛细管电泳的高分辨与质谱的高灵敏度相结合的仪器，是强-强联合的仪器。该联用装置与LC-MS有许多相似之处，一般情况下，能用于LC-MS的质谱仪，只要改变接口，也能用于CE-MS.主要差别是CE的背景电解质的流量（ml·min-1）远小于HPLC流动相的流量（ml·min-1）[2]，因此CE-MS的接口与LC-MS有一定差别。 　 接口技术是实现CE-MS 联用的关键所在。CE-MS联用分为在线联用和离线联用。CE-MS离线联用的关键是对已分离样品的有效收集,并不涉及真正意义上的联用接口技术;而且与离线联用相比, CE-MS在线联用具有样品损失少、自动化程度高、分析速度快等优点,其应用要比离线联用广泛得多。CE-MS在线联用需要设计合适的接口,能够将已分离的样品全部转移到质谱仪中,同时实现样品快速高效的离子化，同时接口对技术要求很高。因此, CE-MS在线联用接口技术是研究的重点, 目前应用于CE-MS 在线联用的离子源包括快原子轰击(FAB) [3] 、电喷雾电离(ESI) [4] 、大气压化学电离(APCI) [5] 、电感耦合等离子体(ICP) [6] 、大气压光电离(APPI) [7]等,其中, ESI源应用最为广泛。 1　CE-ESI-MS 接口技术 电喷雾电离（ESI）接口技术于1984年在MS中提出，溶液在高场中毛细管端 以1-10ul/min的流速喷射进入MS检测器。接着，whitehouse等人[8]的LC-ESI-MS接口问世。但是，对于LC-MS的接口都不能直接由CE-MS加以利用，主要原因有两个：一是CE流量小、流速慢（大多为10~100nl/min）,不能满足各种接口对流速的要求（2~10ul/min）；二是由于毛细管端不存在缓冲液中，所以必须解决CE操作中的电接触问题，保证提供分离电流回路。不过基于whitehouse等人的LC-MS接口理论，smith等[9]将CE分离毛细管的出口端作喷射源，首先实现了CE-ESI-MS的在线偶合。电喷雾（ESI）接口作为最早出现的在线联用接口技术，使得被分析物带上多电荷后采用质谱仪可以检测相对分子质量达几万甚至十几万的生物大分子。由于ESI自身的优势以及CE-ESI-MS接口技术的日益趋于成熟, 使CE-ESI-MS已成为CE-MS联用技术中占主导地位的方法。CE-ESI-MS接口主要分为鞘液接口和无鞘液接口两种。 1.1. 1　鞘液接口技术 鞘液接口技术是最早出现，最早实现商品化的CE-MS接口，基于上面提到的接口问题，其优点在于通过提高样品流速使得喷雾更加稳定,有利于形成稳定的电流回路,同时可改变CE运行缓冲液的组成, 使其满足ESI源的检测要求。主要有低流速( low-flow )鞘液接口，多通道的CE-ESI-MS联用鞘液接口。最近, Li等[10]报道了一种将鞘液接口和无鞘液接口相结合的技术。这种设计既可以消除因鞘液造成的分离完整性的下降, 又可以消除因无鞘液接口不能改变缓冲液而造成的磷酸根离子的离子抑制作用,综合了鞘液接口和无鞘液接口技术的优点。 1.1. 2　无鞘液接口技术 随着科学研究和分析方法对仪器的灵敏度要求越来越高,无鞘液接口技术由于不存在任何稀释效应而逐渐