C肽与胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析法建立及初步临床应用_马强.pdfVIP

Techniques and Methods 技术与方法 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2011, 38(7): 670~676 C 肽与胰岛素双标记时间分辨荧光免疫分析法 的建立及初步临床应用* 1) 2) 1) 1) 1) 1) 1)** 马 强 李来庆 贺 安 林冠峰 邹丽萍 李 明 吴英松 1) 2) ( 南方医科大学生物技术学院抗体工程研究所，广州510515； 广州市达瑞抗体工程技术有限公司，广州510663) 3+ 3+ 摘要 建立钐(Sm )标记检测C 肽(C-peptide)及铕(Eu )标记检测胰岛素(insulin) 的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)， 并初步尝试检测人血C 肽以及胰岛素含量．将抗C 肽单克隆抗体(Biodesign No. E54094M)与抗insulin 单克隆抗体(Biodesign No. E86306M) 混合包被96 孔板，然后用 Sm3+ 标记抗C 肽单克隆抗体(Medix No. 9103)，Eu3+ 标记抗insulin 单克隆抗体 (Biodesign No. E86802M), 运用双抗体夹心一步法建立C 肽/ 胰岛素双标记时间分辨免疫荧光分析法．结果显示：C 肽分析灵 敏度为0.2 μg /L,线性范围为0.5～22 μg/L，平均回收率达到99.6% ，分析内和分析间变异系数分别为4.6%～6.0%和5.1%～ 7.6% ．胰岛素分析灵敏度为0.8 mU/L，线性范围为3.6～180 mU/L，平均回收率为99.4% ，分析内和分析间变异系数分别为 3.7%～6.0%和5.1%～8.0%．C 肽/ 胰岛素双标记检测试剂与PerkinElmer 公司对应的单标记进口试剂盒分别同时测定血清样 本200 份，检测结果高度相关，具有较好的一致性，相关系数分别为0.98 与0.99 ．总之，自建C 肽/ 胰岛素双标记时间分 辨荧光免疫分析方法的性能均可以达到临床检测要求，有望替代现有国内外较为昂贵的单标记试剂，可用于胰岛素分泌不足 导致的糖尿病诊断及糖尿病的大规模普查筛选． 关键词 双标记，时间分辨荧光免疫分析，C 肽，胰岛素 学科分类号 R392.6 ，R446.6 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2011.00037 糖尿病是一组由胰岛素分泌绝对或相对不足所 分辨荧光免疫分析方法(C-peptide/insulin-TRFIA) ， [1] 导致的以慢性高血糖为特征的代谢综合征 ．最新 单次检验可同时得到血清中C-peptide、insulin 两 研究显示，该疾病在中国成年人群中，约有9 240 个参数值，克服化学发光免疫分析法、放射免疫分 万例病例，占总人口数的9.7% ，此外，另有1 482 析法等单次反应只能测定一个指标的不足，并且此 万成年人具有前驱糖尿病症状，约占总人口数的 检测方法操作简便、分析手段简洁、样本量需求 1.55%[2-3] ． 目前临床诊断筛查中，血清C 肽和胰岛 小、成本低廉、能更好地满足临床大规模糖尿病筛 素水平对糖尿病的分型诊断、治疗方案选择和疗效 查的需要． 监测具有重要的临床参考意义，是筛查诊断糖尿病 1 材料和方法