β-兴奋剂残留分析.docVIP

β2-受体激动剂-受体激动剂-受体激动剂-受体激动剂能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质让猪的单位经济价值提升不少，目前，能够实现这种功能的物质是一类叫做-受体激动剂的药物，克伦特罗和莱克多巴胺很危险的副作用，-受体激动剂-受体激动剂β-受体结合而得名，能与β2受体结合的药物作用于平滑肌后，会使心肌收缩力加强、兴奋性增高，习惯又叫作β2-受体激动剂。20世纪80年代，一系列动物实验表明当其用药量超过治疗剂量的5～10倍时，在动物身上就表现出营养再分配效应，脂肪分解增强，蛋白质合成增加，显著提高瘦肉率和饲料转化率。受经济利益的驱使，80年代以来，β-激动剂2-苯乙胺,具有苯乙醇胺结构母核，见图1，随着苯环上的取代基的差异可生成不同瘦肉精品种。 图1 瘦肉精的基本结构 动物长期吃了含大剂量的β2-受激动剂1990-1995年间意大利、法国和西班牙发生瘦肉精中毒事件超过500余起；之后香港、浙江、上海、广州、深圳、台湾陆续发生居民因食用含有瘦肉精的猪内脏、蛇肉、鸡肉造成的中毒事件；工商部门的市场监督抽查中，又在驰名商品“雨润”午餐肉“腊味思” 腊肉养鹅场鸭场例行监测违法添加沙丁胺醇及莱克多巴胺瘦肉精属蛋白同化制剂，被世界反兴奋剂机构禁止β2-受体激动剂2002年以农牧发[2002]1号将克伦特罗、西马特罗、莱克多巴胺列入《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》名录中，之后又陆续发布了《禁止在饲料和动物饮水中使用的药物品种目录》、《饲料和饲料添加剂管理条例》、《兽药管理条例》、《药品管理法》《“瘦肉精”专项整治方案》β-激动剂FDA允许是猪肉中50ppb莱克多巴胺，牛肉中30ppb。加拿大和WHO猪肉标准是40ppb，联合国粮农组织则是10ppb。日本和新西兰进口猪肉中10ppb的残留。β2-受体激动剂）β2-受体激动剂β2-受体激动剂β-受体激动剂β-盐酸葡萄糖醛酸酶消解，用乙酸乙酯萃取，SPE柱净化。 酸性氧化铝柱 莱克多巴胺 2μg/kg HPLC-MS 3 猪尿 试样经酶解，离心后上清液调pH，用异丙醇-乙酸乙酯提取，SPE柱净化。 MCX 克伦特罗等4种 0.5μg/L HPLC-MS/MS 4 猪肝、猪肉、牛奶、鸡蛋 试样酶解，高氯酸调pH去蛋白，上清液调pH后用乙酸乙酯和叔丁基甲醚提取，MCX柱净化。 MCX柱 莱克多巴胺等9种 0.5μg/kg HPLC-MS/MS， 外标法 5 动物尿液 样品经氢氧化钠调节pH，叔丁醇-叔丁基甲醚混合溶液萃取并浓缩，SPE柱净化， MCX柱 马步特罗等11种 0.2μg/L HPLC-MS/MS， 内标法 6 饲料 饲料经盐酸-甲醇混合液提取，醋酸铅沉淀蛋白后用SPE柱净化。 MCX柱 马步特罗等13种 50μg/kg HPLC-MS/MS， 外标法 7 饲料 试样经磷酸甲醇溶液提取，SPE柱净化，LC-MS测定，外标峰面积定量。 MCX柱 沙丁胺醇等3种 0.05mg/kg LC-MS 8 饲料 甲酸甲醇溶液提取，SPE柱净化 MCX柱 苯乙醇胺A 0.05mg/kg HPLC-MS/MS， 外标法 9 动物源食品 采用酶解，乙酸铵缓冲液提取，正已烷脱脂，水相溶液经SPE柱净化，吹干后上机测定 MCX柱 克伦特罗等4种 0.05μg/kg（克），0.5μg/kg（其它） HPLC-MS/MS， 内标法 10 畜禽肉及内脏 高氯酸超声加热提取，异丙醇-乙酸乙酯萃取、浓缩，SPE柱净化，BSTFA衍生化。 WCX柱 克伦特罗 三法均为 0.5μg/kg ①GC-MS(内标法), ②HPLC, ③ELISA 11 猪肉、猪肝、猪尿 高氯酸超声加热提取，碱性条件下乙酸乙酯萃取，SPE柱净化，洗脱液浓缩后BSTFA衍生化。 PCX柱 莱克多巴胺 5μg/kg（猪肉）））β2-受体激动剂药物在酸性条件下溶于水，碱性条件下溶于有机溶剂这一溶解性特性。目前提取β2-受体激动剂的方法是先把样品pH调至该化合物的pKa值以上(通常9.0),使之呈去质子状态,然后用一种有机溶剂提取。表1所列的标准方法大都采用此净化步骤。液液萃取净化方法具有操作简单但繁琐，且需使用较多的有机试剂，同时与溶剂极性相似的杂质也会被萃取出，影响后续分析，因此样品经溶剂萃取后还须经进一步净化步骤。 3、免疫亲和色谱法(IAC) 是在一个免疫亲和柱上通过β2-受体激动剂抗原-抗体的相互作用和免疫亲和力来达到净化样品,具有特异性好、纯化效率高等优点，但价格昂贵且消耗时间长，需特定条件保持亲和完全。其基本步骤是首先获得特异性抗体，抗体纯化后结合到琼脂糖胶上制成柱，样品上柱, β2-受体激动剂与柱上的抗体结合而保留下来，再用溶液洗脱下来用于分析。 王建平等[24]等制备出抗沙丁胺醇的抗血清,提取、纯化IgG制备免疫亲和