平衡透析法用于有机小分子和蛋白质相互作用的研究进展.pdfVIP

第36卷第4期 河南师范大学学报(自然科学版) VjZ．36ND．4 2008年7月 Nor7凇Z SciPnfe) Jo“m口Zo，HPnn，2 U行iwHi砂(N口￡“rnZ _，“Zy．2008 文章编号：1000一2367(2008)04一0093一05 平衡透析法用于有机小分子和蛋白质相互作用研究进展 杨海艳，王公轲，陈得军，卢秀敏，卢 雁 (河南师范大学化学与环境科学学院，河南新乡453007) 摘 要：生物大分子是近年来生命科学研究的热点和难点之一，有关蛋白质的各类研究也是人们比较感兴趣 的课题．平衡透析法是定量研究蛋白质与有机小分子相互作用的经典方法．通过平衡透析法的研究我们可以讨论蛋 白质与有机小分子的结合数目、结合平衡常数及作用力情况等．近年来，国内外学者在此方面做了大量的工作，提出 了各种各样的结合模型．本文就此方面的研究进行综述． 关键词：蛋白质；有机小分子；相互作用；平衡透析 中图分类号：0658．9 文献标识码：A 有机小分子与蛋白质相互作用一直是生命科学中引人关注的问题，此方面已有大量的文献[1—2]报道， 但有机小分子与蛋白质的作用机理和平衡规律尚在研究之中．为了定量的研究有机小分子与蛋白质的相互 等．很早以前，人们对蛋白质与有机小分子的作用就进行了大量研究．从化学角度看，可分为结构研究与反应 平衡研究两个方面；从研究手段上看，有紫外可见光谱法、荧光光谱法、平衡透析法、核磁共振法、电位滴定 法、红外光谱法以及圆二色谱法等．本文就近几十年来用平衡透析法研究蛋白质与有机小分子结合的研究现 状和发展方向进行综述． 1平衡透析法 平衡透析法是研究小分子与生物大分子结合平衡的经典方法．透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜 两边的浓度梯度形成的．透析的速度与膜的厚度、透析的小分子溶质在膜两边的浓度梯度及透析温度有关． 测定蛋白质结合小分子物质的最大结合位点数的实验方法有几种，如双波长法、摩尔比法等，但本质上是相 同的．不论采取何种方法，必须求出未与蛋白质结合的小分子(即游离小分子)的量，才能求出结合位点数及 结合常数．因此，能否准确得到游离小分子的量是衡量一个方法结果准确性的关键．在诸多实验方法中，平衡 透析法虽然操作复杂且费时，但因它可以直接得到游离小分子的浓度，从而被认为是较准确的方法． 2结合模型的研究 2．1 Scatchard模型 处理生物大分子和小分子作用的常用方法．该模型的基本假设是：对于一种配体，假设蛋白质上每个结合部 位都一样(即结合体和每个结合部位作用的自由能相等)，并且这些结合部位与配体的作用是相互独立的，不 存在相互作用．由此推导出的Scatchard方程为： ，z／[L]一KN—K咒， (1) 其中是每一分子蛋白质上结合的配体数，[L]是溶液中游离的配体浓度，K为结合常数，N为最大结合部 收稿日期：2007一09—29 基金项目：国家自然科学基金；教育部高等学校博士学科点专项科研基金(20060476001) 作者简介：卢雁(1953一)，男，河南舞阳人，河南师范大学教授，博士生导师，主要从事生物热力学方面的研究． 94 河南师范大学学报(自然科学版) 白质的作用时，对Scatchard方程进行了修正，推导出两个方程： 1／[L]=KN／咒一K， (2) 1／[L]一(1／KN)(1／[L])+1／N． (3) 如果引入Hill参数行／(7z一1)，则推导出的修正方程为： (他一1)／恕一一(1／NK)(1／[L])+(N一1)／N． (4) Congdon认为，当蛋白质与染料浓度之比较大时，此时只有蛋白质上的强结合位点