生物膜动态变化分子机理与功能的研究.pdfVIP

项目名称： 生物膜动态变化的分子机理与功能研究 首席科学家： 陈晔光 清华大学 起止年限： 2010 年 1 月-2014 年 8 月 依托部门： 教育部 一、研究内容 1. 关键科学问题 本项目将重点围绕生物膜动态变化这一膜生物学研究的国际前沿领域，系 统地开展生物膜动态变化分子机制的研究，并重点揭示生物膜动态变化在细胞信 号转导、能量代谢、增殖分化、物质运输和循环利用等关键生命活动中的重要作 用： （1）生物膜动态变化的分子机理 细胞生命活动得以实现依赖于生物膜体系的动态特征：物质动态交换及自身 的更新与重构。细胞内各种生物膜体系始终处于不断的形成、消失及重建过程之 中。本项目将研究生物膜动态变化的分子机理，寻找调控其变化的关键蛋白质分 子，研究蛋白质与蛋白质之间、蛋白质与膜脂之间相互作用关系，从细胞质膜、 细胞器膜、核膜、细胞囊泡膜等方面阐明生物膜变化的分子机理。 （2）生物膜动态变化在细胞生命活动中的作用 生物膜在生命活动中承担着重要的作用，其动态变化过程将广泛地影响着细 胞的各种功能。本项目将探索细胞囊泡膜与物质运输之间的关系、生物膜动态变 化对信号转导的影响、核膜的动态变化对细胞增殖的影响、细胞器膜与能量代谢 的关系以及生物膜与物质及细胞器的回收利用等相关膜生物学重点问题。 2．主要研究内容： （1）生物膜转运及其调控机制的研究 致密核心囊泡是神经肽和激素转运的主要承担者，对其转运过程机制和调 控的研究，相对于突触囊泡来言要少得多。我们将集中力量，主要研究以下方面 的内容：I.通过对一种高度保守定位于高尔基体的膜蛋白的研究来探索致密核心 囊泡囊泡生成（biogenesis）和成熟（maturation）机制；II.锚定和激活是囊 泡融合前的关键步骤，转运囊泡与靶膜（包括细胞质膜和各细胞器膜）的特异性 锚定是决定囊泡融合的时间、空间特异性和囊泡融合速率的重要因子，对其分子 机制和调控的认识还远未清楚。我们将选择多种Rab蛋白及它们下游效应物蛋白， 研究它们在囊泡锚定中的作用、作用机制及其这些分子的相互作用网络；III. 从半融合 （hemi-fusion）机制、决定囊泡膜融合的SNARE复合物解聚合和各SNARE 蛋白的循环利用等方面展开，对溶酶体膜不稳定的分子机理进行研究。 （2）生物膜形态发生及维持的分子机制 我们将以内质网网膜的形态为侧重点，深入研究膜蛋白在塑造生物膜形态 中的作用。具体包括：a).对有曲膜功能的成管膜蛋白的结构与功能进行探究。 酵母细胞的成管膜蛋白Yop1p和Rtn1p，虽然能被大量提纯，但是很难被结晶， 所以用X光衍射的方法解析其结构不可行。我们将从Yop1p蛋白入手，在不同位 点引入半胱氨酸，通过二硫键的形成与否，来判断氨基酸的侧链是否邻近，从而 来推测这些膜蛋白的大致构象，如穿膜螺旋的排列方式等。b).高等动物中的 Atlastin-1 蛋白及其酵母中的 Seylp 都是 Dynamin 家族中的嵌膜 GTP 酶，我们 推测其可能参与内质网管状网络的形成，因此将对 Dynamin 家族嵌膜 GTP 酶影 响膜形态的机制进行研究。 （3）生物膜组成成分的动态变化分析 通过技术集成和条件优化建立由高分辨质谱、多维毛细管液相色谱、稳定同 位素标记（如 SILAC 和 iTRAQ 等)和无标记等组成的，能够适合不同复杂程度的 生物样品（如组织样本、细胞样本）的定量（膜）蛋白质组学技术平台。同时主 要以生物膜和线粒体为样本，探索具有多次跨膜即高度疏水的膜蛋白和低丰度的 膜蛋白质谱鉴定方法，提高膜蛋白的鉴定率。另外，我们将开展不同生理状态或 生理过程（如发育、细胞分化）和不同病理状态下，生物膜动态变化过程中，主 要膜蛋白、亚细胞器蛋白质组的表达水平的及其翻译后修饰的动态变化规律分析 研究。开展 II 糖尿病发病机制的相关膜蛋白研究及肿瘤相关重要膜蛋白或抗原 的研究。 （4）生物膜的动态循环与自吞噬调控 自吞噬在很多不同的细胞器的产生、消失和再生之间起着重要的作用。我 们最近发现在吞噬溶酶体形成之后，溶酶体的膜成分可以通过在吞噬溶酶体上形 成一个管状结构而得以回收利用，最后形成新的溶酶体，并发现这一过程受到 mTOR 激酶的调控。我们将系统、深入地对这一过程的分子机理进行研究，主要 包括：筛选出调控自吞噬性溶酶体再生的新基因并研究其调控作用；用数学建模 和系统生物学的方法探讨 mTOR 激酶、自吞噬及自吞噬