心肌内注射17β-雌二醇纳米粒对大鼠心梗修复作用.pdfVIP

心肌内注射17β-雌二醇纳米粒对大鼠心梗的修复作用1 1 1 2 1▲ 1 1 1 刘伟强 ，陈玉成 ，熊素彬 ，曾智 ，金鑫 ，王斌 ，王浩宇 1.四川大学华西医院心内科，成都（610041 ） 2.浙江工业大学药学院，杭州(310032) E-mail ：chenyucheng2003@126.com 摘 要：目的探讨心肌内局部肌注17β-雌二醇纳米粒对大鼠心梗后血管生成、梗死面积、 死亡率的影响。方法 以聚乳酸和乙醇酸共聚物(poly-dl-lactic-CO-glycolic acid,PLGA)纳米粒 为载体制备17β-雌二醇纳米粒,评价其理化性质及体内、外药物释放参数.制备去卵巢大鼠心 梗模型,随机分为实验组(在心梗边缘区注射17β-雌二醇纳米粒4mg/100g,n=20), 实验对照组 (在心梗边缘区注射空白纳米粒4mg/100g,n=20 ), 空白对照组(仅制备去卵巢心梗模型,n=20).1 月后免疫组化法检测心梗边缘区毛细血管密度(microvascular density,MVD) 及eNOS 累积光 密度(IOD)值,测量梗死面积。结果 体外释放参数显示,1月时17β-雌二醇累积释放率已接近 100%,体内释放曲线显示心肌内注射1月后血清仍保持较高药物浓度(345.480 ±8.906pg/ml). 心梗1 月后与对照组相比, 实验组免疫组化法显示梗死边缘区毛细血管密度增加 (P0.05),eNOS蛋白IOD值增多(P0.05),梗死面积减小(P0.05),死亡率无升高(P=1.000)。结论 心肌内局部注射17β-雌二醇纳米粒可有效促进大鼠梗死后心肌毛细血管生成,减少心梗面积, 不增加死亡率,对心梗有较好的修复作用. 关键词：雌二醇；纳米粒；血管生成；梗死面积 冠心病是当今妇女最重要的死亡原因之一,虽已有药物溶栓、冠状动脉成型术(PTCA 和 支架植入术）及冠状动脉旁路移植术等常规治疗方法,但对部分患者(如晚期冠心病等),仍缺 乏有效的手段.有研究表明皮下注射 17β-雌二醇具有较好的促心肌血管生成作用[1,2],但临床 随机对照试验却发现在雌激素替代治疗中带来更多的乳腺癌、静脉血栓、脑卒中等发病率, 甚至抵消了其对心血管的获益[3],改变用药方式(局部用药)可能是较好的应对策略.但其在心 脏局部应用是否能有效促心肌毛细血管生目前尚不清楚.同时雌激素替代治疗对梗死面积的 影响也有争议[4,5] [5] ,且可能增加死亡率 ,消弱了其在冠心病中的应用价值.我们利用纳米技术 制备具有良好缓释作用和组织穿透能力的17β-雌二醇纳米粒,心肌内局部注射,探讨其对大鼠 心梗后心肌毛细血管生成及梗死面积、死亡率的影响.。 1 对象和方法 1.1 器材 SD 雌鼠( 四川大学华西实验动物中心)质量200±20g;17β-雌二醇（Sigma）;PLGA （50:50, 分子量5万,山东省医疗器械研究所）;兔抗大鼠eNOS 多克隆抗体、兔抗人VIII 因子相关抗原抗 体(武汉博士德公司);雌二醇放免试剂盒(北方生物所);HX-300 小动物呼吸机;AMRAY-1000B 扫描电镜(中科院科学仪器厂);数显恒温磁力搅拌器（78HW-1,杭州仪表电机有限公司）;水浴 恒温振荡器（THZ-82 常州国华电器有限公司）;高速冷冻离心机（Beckman Allegra 64R ）;紫 外分光光度计（Heλios-γ,Thermo ）。 1.2 17β-雌二醇纳米粒的制备 取PLGA 和17β-雌二醇（17β-雌二醇:PLGA=1:10）,加二氯甲烷- 甲醇（30:1 ）溶解,配制成含 PLGA 3mg/ml 的浓度,作为油相.取PVA 和DMAB （DMAB:PVA=3:100 ）溶解于双蒸水中, 配制成含PVA 1% 的溶液,作为水相.按油相:水相=1:3 比例将油相注入水相中,磁力搅拌