脱氧核酶传感器的研究进展.pdfVIP

第28卷 第2期 摇 摇 大 学 化 学 Vol.28 No.2 摇 2013年4月 UNIVERSITY CHEMISTRY Apr.2013 摇 脱氧核酶传感器研究进展 * * 聂绩摇 周颖琳 摇 张新祥 (北京大学化学与分子工程学院摇 北京 100871) 摇 摇 摘要摇 脱氧核酶是利用体外分子进化技术获得的一类具有高效催化活性和结构识别能力的单链DNA 片 段。 本文主要介绍了两类脱氧核酶,即RNA切割型脱氧核酶和G鄄四聚体型脱氧核酶在生物传感体系中的发 展和应用。 摇 摇 关键词摇 脱氧核酶摇 RNA切割型摇 G鄄四聚体型摇 传感器 [1] 摇 摇 1982年,Cech等 发现四膜虫核糖体RNA基因转录产物的I 型内含子剪切与外显子拼接过程无 需任何蛋白质存在,这打破了酶的化学本质是蛋白质的概念,证明了RNA 具有酶的催化功能。 1983 [2] 年,Altman等 在研究核糖核酸酶P时发现具有切割核糖体RNA前体功能的RNA,并证明其具有全酶 活性。 因为核酶(ribozyme)的发现,Cech 和Altman共享了1989 年诺贝尔化学奖。 1994 年,Breaker 和 [3] Joyce等 利用体外定向分子进化技术筛选得到第一条人工合成的具有切割磷酸二酯键功能的单链 DNA,这种具有酶催化功能的DNA就叫做脱氧核酶(deoxyribozyme或DNAzyme)。 核酶与脱氧核酶构 成了功能核酸的重要部分,核酶包括天然与人工合成核酶;但至少目前为止,自然界没有发现天然脱氧 [4] 核酶。 人工合成的脱氧核酶迄今已有100 多种 ,由于其结构与功能的多样性,广泛应用于基因治疗、 核酸分析、传感器构建等领域。 1摇 脱氧核酶基本概念 摇 摇 脱氧核酶的化学本质是DNA。 相较于RNA而言,脱氧核酶缺少呋喃糖环2鄄OH,这决定了脱氧核酶 的结构稳定性强于以RNA成构的核酶。 所有脱氧核酶均为单链,同RNA相似,可以形成复杂多样的折 叠结构并显示出催化功能。 脱氧核酶可以催化多类反应,如 RNA 或 DNA切割、DNA 连接、DNA水解 [5] 等 。 与传统的蛋白酶相比,脱氧核酶具有稳定性高,相对分子质量小,易化学合成、修饰与复制,受pH 等环境因素影响小等优势。 脱氧核酶非常容易进行以核酸为识别模式或者信号表达模式的传感器构 建;另外,脱氧核酶具有对DNA进行连接与断裂的催化能力,可以应用到基因调控与治疗中。 摇 摇 各种功能多样性的脱氧核酶可通过合理设计不同的体外筛选方式获得。 筛选过程往往是从一个固 相化学合成的DNA随机文库出发,通过合理设计,将能够催化与不具备催化能力的寡核苷酸序列区分 开;再利用聚合酶链式反应(PCR),对具有催化能力的序列进行扩增,扩增后获得一个新的文库并应用 于下一轮筛选。 文库中特异性序列纯度随循环筛选过程进行而增加,直至达到较高催化活力水平时结 束筛选。 完成筛选后,需要对获得的序列进行表征以及效应评价。 一般来说,在体外筛选过程中,需要 进行反向筛选,以有效消除没有催化活性的“寄生序列冶;也可结合突变与修饰辅助重新筛选提高酶活 性。 也就是说,应针对不同的筛选目的,合理设计与优化筛选方式。 摇 摇 脱氧核酶的催化功能特性改变了核酸仅仅是编码以及遗传信息携带者的观念。 目前,在分子生物 [6] 学以及基因工程上,脱氧核酶主要是作为一种工具酶存在 。 脱氧核酶可以在细胞水平上敲除某特异 * 通讯联系人,E鄄mail:zhouyl@pku.edu.cn;zxx@pku.edu.cn 2 大 学 化 学 第28卷摇 性基因,通过观察该敲除基因对于细胞生理过程中的作用,可以探明其功能。 此外,利用