基因组学 课件 4基因组测序与序列组装.pptVIP

测序技术的发展 放射性同位素标记底物：灵敏度高 荧光标记物：灵敏度与分辨力，便于仪器阅读。一种碱基一种颜色（A红色，G黄色，C蓝色，T绿色） 毛细管电泳：取代聚丙烯凝胶平板电泳，96个泳道，每次可同时进行96次测序，每轮实验不到2小时，1天可完成近千次反应 光点测序pyrosequencing：无须电泳，每连接dNTP时释放1个焦磷酸，焦磷酸在磷酸化酶的作用下转换为化学能，发出光亮。每次只加入1种dNTP DNA芯片测序：将各种排列顺序的寡聚核苷酸点在芯片上，DNA分子与芯片温浴，能杂交的寡聚核苷酸都会在确定位置发出信号，获取信息进行对比组装。 2000年6月26日，美国总统克林顿(中)、塞莱拉公司董事长兼首席科学家克雷格·文特尔(左)和人类基因组计划首席科学家弗胡西斯·柯林斯(右)在华盛顿白宫参加庆祝人类基因组草图绘制成功。 实例：果蝇基因组的鸟枪法测序 第一个完全采取鸟枪法完成基因组测序的真核生物，180Mb 构建3个基因组文库，插入子长度分别为2kb、10kb、130kb 10kb长度足以覆盖果蝇基因组中大多数重复顺序，可在序列组装时找到单一顺序连接真实的重叠克隆 130kb便于大范围序列组装，有效建立全基因组的物理图框架 引导鸟枪法 构建插入片段为2kb的人类基因组质粒文库，每个克隆经双向测序可读500bp 构建第二个平均插入子为10kb的人类基因组质粒文库，经双向测获得