吖啶橙共振光散射法测定酵母核糖核酸.docVIP

吖啶橙共振光散射法测定酵母核糖核酸 夏晓姗郑红(（青海师范大学化学系 青海省西宁市 810008）（师范大学化学 重庆 401331） 摘 要：在碱性条件下，酵母核糖核酸在333 nm处的。共振光散射增强的程度与酵母核糖核酸的质量浓度呈良好的线性关系据此建立了一种测定酵母核糖核酸的方法。在实验条件下，测定的线性范围为0.05 ~15.0 μg·mL-1，检限为0.017 μg·mL-1。关键词：吖啶橙；酵母核糖核酸；共振光散射O657.39 Determination of yRNA with Acridine Orange by Resonance Light Scattering Technique XIA Xiao-shan1,ZHENG Hong*2,1,SONG Lin1,ZHANG Jing1,GUO Hai-yan1,GAO Xiu-zhen1 Department of Chemistry，Qinghai Normal University，Xining 810008 )(2. School of Chemistry，Chongqing Normal University，Chongqing University Town Huxi campus 401331) Abstract: The resonance light scattering (RLS) spectra of the Acridine Orange-yRNA conjugate were studied. The RLS of acridine orange is greatly enhanced by yRNA in pH 11.20. There is a resonance light scattering peak at 333 nm. Thus, a new RLS method was established for the determination of yRNA. Under optimal conditions, The intensity of RLS signal is proportional to the concentration of yRNA in the range from 0.05 ~ 15.0 μg·mL-1 with the determination limit of 0.017 μg·mL-1 .This method is simple, rapid and sensitivity has been applied to the determination of yRNA in mixed samples with satisfactory results. Key Words: Acridine orange; yRNA; Resonance light scattering 吖啶橙(AO)是一种荧光染料，在细胞活性检测方面，可以用吖啶橙染色方法来检查细胞所产生的荧光颜色，进而判断细胞活性[-2]。常用作荧光指示剂，肿瘤细胞及细菌、核酸染色剂及移码突变的诱变剂[-4]。核酸是生命的最基本物质，在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的作用。核酸不仅是基本的遗传物质，而且在蛋白质的生物合成上也占重要位置，因而在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。目前，对于核酸的研究已拓展到生命科学的各个领域[-6]。本文采用共振光散射法对核酸进行定量分析，它是继分光光度法、荧光分析法之后的一种新兴技术[-11]，具有简便、快速、选择性高、线性范围宽等特点。 F-4600型荧光分光光度计(日本日立)；TU-1901型紫外可见分光光度计(北京普析)；PB-10型pH计(yRNA，华美生物工程公司，分析纯)储备液：准确配制一定浓度的yRNA(准确称取yRNA 0.1g溶解并定容至100mL容量瓶中，轻摇，使之混合均匀，并在4 ℃以下保存)。工作液浓度为10 μg·mL-1；吖啶橙(AO)，上海江莱生物科技有限公司，分析纯)：2×10-3 mol·L-1500mL容量瓶中，轻摇，使之混合均匀)，pH 11.2。试验用水均为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 试验方法 于10 mL比色管中依次加入1.2 mL B-R缓冲溶液(pH 11.2)，1.2 mL 2×10-3 mol·L-1AO溶液以及一定量的核酸标准溶液，轻摇，使之混合均匀，然后用蒸馏水稀释至刻度摇匀。静置10 min后，将溶液置于激发波长(λex)与发射波长(λem)相等处进行同步扫描，可得共振光散射光谱。在最大共振光散射峰处(333 nm)测得共振光散射强度I值，以I作为测定核酸的信号响应值。 结果与讨论 光谱特