壳聚糖-Cu（Ⅱ）螯合物的结构表征及其抗菌活性观察.pdfVIP

《坷料工业》·2009年第30鲞第22期 壳聚糖一Cu(11)螯合物的结构表征及其抗菌活性观察 张亚丽 张 敏 韩新燕 张秋华 朱叶萌 谢正军 壳聚糖(简称CTS)是由虾、蟹壳脱钙、蛋白质和脂 99一l大功率磁力搅拌器 、eppendoff5804型离心 肪后的甲壳质经脱乙酰化处理后得 到的天然高分子 机 、SPM一9500J3型原子力显微镜 (Atomicforcemi— 聚合物 ，是 自然界 中唯一的碱性多糖，同时也是 自然 croscope，AFM)、AVATAR370FT一氓 、超净工作台、摇 界中大量存在的一种可再生资源。由于壳聚糖分子中 床 ；恒温培养箱 含有大量游离一NH ．且一NH 邻位是一OH，可借氢键 ， 1．2 CTS、CTS—Cu(Ⅱ)的表征 也可借盐键形成具有类似网状结构的笼形分子 ，从而 溴化钾压 片后 ，红外光谱分析 CTS与 CTS—Cu 对金属离子有着稳定的配位作用。由于其配合物具有 (Ⅱ)化学基团结构变化。 独特的物理、化学性质及生物活性而越来越引起了配 1．3 细菌悬液 的制备 位化学家的兴趣 。同时壳聚糖具有 良好的生物粘附性 将真空冷冻干燥 的菌种用无菌吸管接种于灭菌 和多种生物活性，能够促进伤 口愈合，降低胆固醇，提 MH培养基中，37℃，120r／min摇床 中培养过夜．使冻 高机体 免疫功能。且具有杀菌作用，还能抑制癌细胞， 干菌体溶解成悬 浮状 ：转 接 3次后 。取细菌培养液 防止癌症复发 。它对人体细胞无毒副作用，并且有亲 50 接种于 50ml新鲜的 MH 肉汤培养基 中，37℃ 和性，不与体液反应．是一种很好的保健品。 摇床 中培养到对数生长期 ，4℃下 4000r／min离心 铜是动物体内必需的微量元素之一 ，近年来 由于 10rain，用预冷的 10reotol／1PBS(pH值 7．4)缓冲液洗 其特有的抗菌性能，在饲料行业 中被广泛研究。但是 涤 2次 ，重 新 悬 浮在 PBS缓 冲 液 中 ，制 成 浓度 约 由于人们对铜的大量使用 ，造成 了环境污染及畜产品 为 0．01g／ml的悬浮液，备用。 危害，所以亟待开发吸收效率高的铜制剂。因此本文 1．4 AFM成像 利用原子力显微镜对壳聚糖一Cu(II1螯合物对沙 门氏 将受试菌接种到灭菌的MH肉汤培养基 中，置于 菌作用前后 ，沙门氏菌的形态结构变化进行了观察 比 37℃摇床中培养 ，分别在 0(未加杀菌材料)、30、60、 较 ，试验结果为进一步探讨沙 门氏菌对螯合物的敏感 180min时取样 ，用 PBS将培养物适 当稀释后 ，用微量 性及其相互作用机制提供了依据 。 移液器移取 10L菌液滴于新解离 的云母片表面 ，再 1 材料及方法 滴加 2．5％的戊二醛溶液 固定 5min：用滤纸从云母片 1．1 试剂与仪器 的边缘将多余的溶液吸去 ，用3次纯化水洗 2次 ，以 壳聚糖(chitosan，CTS；脱乙酰度 95％；浙江省金壳 消除盐分的干扰 ：样品在空气中 自然风干后用 AFM 生物化学有限公 司生产)、CuSO ·5H20、冰 乙酸 、无水 观察细菌形态 的变化 。用 SPM一9500J3型原子力显微 乙醇 、丙酮 。试 剂均为分析纯 ，试验用水为双蒸水 ； 镜 (AFM)(Et本岛津生产)，在接触式扫描模式下扫描 CTS—Cu(II)螯合物 由本课题组合成。 表面形态，所用针尖为 Si3N 针尖 ，在恒力模式下采集 猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholeraesuis，S．choler— 图像 ．图像通过 自动平滑处理后 ，以消除慢扫描方 向 aesuis)ATCC50020购 自中国药品生物制品检定所 ： 上 的低频噪音 。 Muller—Hinton营养 肉汤培养基 (MHB)、Muller— 2 结果与分析 Hinton营养