李属种间杂交亲和性及胚培养研究.pdfVIP

李属种间杂交亲和性及胚培养研究 尚霄丽1’2，朱更瑞秘，李靖1，冯义彬2王力荣2 (1河南农业大学林学园艺学院，郑州，450002； 2中国农业科学院果树研究所，郑州，450009) L．)、杏(P．armeniaca salicinaLinn．)等李 摘要：以桃(Prunuspersica Linn．)、李(Prunus 属果树11个品种为亲本共17个组合进行远缘杂交，对杂种胚进行了胚培养，并对部分杂种进行了分子鉴 定。研究表明：李属种间杂交以杏为母本坐果率最高为11．5％，明显高于桃与李为母本。桃为母本的组合 30～35天后出现了严重的落果现象，落果率均超过90％；但李、杏为母本落果不严重。杏为母本的杂交组 合杂种严重败育，胚败育率最高为93．18％。杂种接种于WPM培养基发育成健壮小植株，SSR技术对杂 种鉴定结果表明，所获植株为真杂种。 关键词：李属：远缘杂交：亲和性；胚培养；SSR 近年来，国内有关李属(Prunus)种间杂交的研究已有报道。有关李×杏、桃X李的研 究较多，其中王善广Ⅲ、李锋心1、曾烨n3等对李、杏杂交亲和性进行了探索，确定了李、杏 间的亲缘关系并得NT杂种后代。曹后男n1、马瑞娟晦1等研究了桃、李间交配亲和性及其不 亲和性的原因。马锋旺等陋1于1992-1993年研究发现桃、杏杂交有一定的亲和性，但未获得 桃杏杂种苗木；杨红花”一1、刘文阳1采用三级放大的研究方案，成功获得了桃、杏杂种苗， 并对胚抢救得到杂种苗进行了SSR分子鉴定。但杨红华、刘文等研究的杂交组合仅限于杏× 桃、李，桃×杏，未同时设置桃X杏、李的杂交组合。因此，本试验分别以桃、李、杏为母 本，并且将获得的杂种进行胚培养及分子鉴定，探讨桃与李、杏间的亲和性，从而为远缘杂 交育种提供依据。 1材料和方法 1．1材料 试验于2005～2006年在中国农业科学院郑州果树所桃资源圃进行。试验材料：普通桃 桃、‘96—3—12’桃、‘96-7-52’桃；山f眺．(Prunus (PrunusarmeniacaLinn．)：凯特杏：李(Prunus￡j朋．)：黑宝石李。 1．2方法 1．2．1李属种间杂交及调查亲和性 根据父母本的花期，分别进行温室催花或采集田间大蕾花期的花粉，室温条件下阴干， 置干燥器于4℃冰箱中保存备用。授粉后30天统计坐果数；即将成熟时，采收果实，统计 第2次坐果率，并以第2次坐果率高低为指标评价比较不同处理对远缘杂交亲和性的影响。 用破核剪剪开种子，取出种仁，调查种子的败育情况。 254 1．2．2远缘杂种胚抢救技术体系的建立 以杂种桃幼胚为试材，以1／2MS(仅对大量元素进行减半)和WPM为基本培养基，附 加不同浓度的植物生长调节剂，蔗糖20g·L～、琼脂粉6g·L～，pH值调至5．8，进行预 备试验，筛选出适合胚萌发及生长的培养基。将杂种果实在超饱和漂白粉溶液中浸泡20～ 30min，用破核剪剪破果核，取出种胚。在超净工作台内将种仁先用70％酒精冲洗30s，再用 O．1％升汞灭菌8min，无菌水冲洗5～6次，用镊子剥去种皮接种到培养基中。将生长健壮的 杂种胚培苗经过7天炼苗，于2005年11月--2006年1月分批移入温室。 1．2．3胚培养杂种幼苗的分子鉴定 采用SDS法提取胚培杂种幼苗及其亲本基因组DNA，电泳法检测DNA浓度和质量。 PCR扩增反应程序及体系参照陈巍的方法，反应体积为10uL，引物为BPPCT034|1…。 2结果与分析 2．1李属种间远缘杂交亲和性 从表l可以看出，桃与李、杏杂交组合均具有一定的亲和性，但以杏×桃组合坐果率较 高。其中，凯特杏X‘96—2—43’桃杂交组合坐果率最高为11．5％，是正交坐果率的25倍； 其次凯特杏×有明白桃、凯特杏ב97—2—8’桃，分别为正交坐果率的2．78、37．63倍。 桃与李杂交组合正反交坐果率差异不明显，但以李为母本坐果率较高，其中黑宝石李× 金风桃杂交组合最高为2．62％；以桃为母本坐果率均较低，‘96-2-43’桃×黑宝石李、金凤 桃X黑宝石李杂交组合坐果率分别为0．52％、0．25％。 ‘96—2—43’桃×凯特杏与‘96-2-4