半胱胺对斜带石斑鱼生长调控研究.pdfVIP

从产量到质量——海水养殖业发展的必然趋势 [27]杭晓敏，唐涌濂，柳向龙．多不饱和脂肪酸的研究进展．生物工程进展，200l，2l(4)： 18—21． 楼宝1’2 高露姣3毛国民1’2史会来∽ 骆季安L2 (1．浙江海洋学院海洋与渔业研究所舟山316000： 2．浙江省海洋水产研究所舟山 316100： 3．中国水产科学研究院东海水产研究所上海 200090) 第八节半胱胺对斜带石斑鱼生长调控研究 一、引言 鱼类生长和生长激素(GH)分泌活动的调控是通过刺激性和抑制性因子的双重作 用来实现的。实验证明促生长激素释放因子(GRF)是鱼类GH释放的主要刺激性因 鱼血液中GH含量明显增加…。不同来源的GRF对GH释放的刺激效应在虹鳟、罗非 鱼等上也同样存在旧一j。从鲤鱼下丘脑已分离并鉴定出生长激素释放激素(GHRH)， 该肽具有促进金鱼和虹鳟脑垂体分泌GH的活性¨以1；除此之外，一些神经肽类或神经 可以直接或间接促进鱼类的GH分泌”q1。 认为是GH释放的主要抑制因子¨o|。在脊椎动物中，SRIF—14的结构具有很高的保守 GH[3．12_131；又能抑制由DA[14】、GRF[3，1 且对于脑垂体分泌的其他激素，如：促甲状腺激素促(髑H)，肾上腺皮质激素 14还具备调控生长与生殖之间能量分配的作用ⅢJ。 近年来，半胱胺(cs)作为生长抑素抑制剂，被广泛运用于家畜，家禽的饲养。 研究表明，cs的促生长作用主要通过破坏sRIF分子构型中的二硫键，使其免疫和生物 活性丧失，解除SRIF对GH、IGF的抑制作用，促进动物的生长¨¨19J。同时，诸多研 究表明，半胱胺对离体及在体的各种组织内sRIF的免疫活性均有特异的耗竭作用¨9l。 在鱼类有关CS作用的研究相对较少。长期投喂含CSH的饲料可以显著提高草鱼血清 GH水平和促进草鱼生长啪】，注射不同剂量的csH均能使黄鳍鲷脑垂体GH水平显著 424 第五章营养、代谢与消化生理 提高旧】。但在分子水平研究cS对鱼类生长激素及其受体的影响，国内还尚未有过报 道。 本研究以重要海水经济鱼类斜带石斑鱼(Omnge—spottedg∞uper，印i呷k沁∞- 幻浊s)为研究对象，初步研究了csH对斜带石斑鱼生长激素及其受体mRNA水平的影 响以及作用机理；建立了斜带石斑鱼cH及2种GHR基因的Real—timePCR定量检测方 法，为从分子水平研究斜带石斑鱼的生长规律与内分泌调控打下基础。 二、材料与方法 (一)实验动物 斜带石斑鱼(印i，即M獬∞幻漱)购自广东惠州广东省大亚湾水产实验中心，驯 进行实验。 (二)药品及试剂 半胱胺盐酸盐(Cyste锄ine ReverTra RealtimePCRMasterMix Ace—a一。。M瞄t，Real．timePCR试剂盒SYBR@Green 购自日本ToYOBO公司；胶回收试剂盒e．zⅣ．A@GelEx的ction硒t和质粒提取试剂盒 e．zⅣ．A@Plasmid PCR Extracti彻Kit为美国Omega Product CloningKit载体连接试剂盒，z如DNA PCR引物由广州赛百胜生物技术公司合成；其余均为国产分析纯试剂。 (三)实验设计 1．实验用鱼的驯养 选取体格健壮，规格大致相同的斜带石斑鱼幼鱼分养于多个水族缸里，实验鱼 h保持 人工通气和循环过滤海水。驯养期间投喂基础饲料。每天投喂两次(8：00和16：00)， 每天的投喂量约为鱼体质量的5％(具体情况视天气和鱼类摄食情况而定)。驯养为 期2周。 2．CSH拌料投喂对斜带石斑鱼GHmRNA及两种GHRmRNA水平的影响 实验用龟驯养结束以后，开始进行投喂实验，实验为期8周。自然光照和水温， 24h通气